본 발명은 이중 돌연변이를 가지는 인간 인터페론-베타 변이체 및 인간 인터페론-베타 변이체의 안정성을 향상시키는 방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 인간 인터페론-베타의 17번째 아미노산인 시스테인이 세린으로 치환되고, 27번째 아미노산인 아르기닌이 트레오닌으로 치환된 아미노산 서열을 포함하는 인간 인터페론-베타 변이체 및 인간 인터페론-베타의 27번째 아미노산인 아르기닌이 트레오닌으로 치환된 인간 인터페론-베타 R27T 변이체의 17번째 아미노산인 시스테인을 세린으로 치환하는 단계를 포함하는, 인간 인터페론-베타 R27T 변이체의 안정성을 향상시키는 방법에 관한 것이다. 본 발명이 제공하는 인간 인터페론-베타 변이체는 정제 효율 및 안정성이 매우 높아 이를 활용한 치료제 생산에 유용하게 활용이 될 수 있다.