ＩｇＡ 항체와 반응하는 헬리코박터 파이로리 요소분해효소항원결정기재조합 단백질 및 그의 제조방법
The recombinant protein containing antigenic determinant of Helicobacter pylori urease to which IgA antibodies are reactive and its methods
특허 요약
본 발명은 영ㆍ유아의 헬리코박터 파이로리 감염의 진단을 목적으로 헬리코박터 파이로리(Helicobacter pylori)가 생성하는 요소분해효소 단백질 중 사람에게서 항원성을 보이는 항원결정기만 생성하는 헬리코박터 파이로리 요소분해효소 항원결정기재조합 단백질 제조방법에 관한 것이다. 이차원전기영동과 면역블롯 분석법으로 헬리코박터 파이로리 항원결정기를 맵핑(mapping)하여 요소분해효소가 IgA 항체에 강하게 반응함을 통해 혈청학적 진단에 있어서 특이도를 높였으며, 항원 성분의 정제를 용이하게 하는 장점이 있다. 또한, 영ㆍ유아의 헬리코박터 파이로리 감염 여부 진단에 있어서 모체로부터 전달되는 항체와는 구별되어 혈청학적으로 특이하게 감별함으로써 영ㆍ유아의 보건관리를 보다 향상시킬 수 있다. 헬리코박터 파이로리, 항원결정기재조합 단백질, 요소분해효소, IgA 항혈청, 혈청학적 진단, 영ㆍ유아 진단
청구항
번호청구항
1

서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 헬리코박터 파이로리(Helicobacter pylor)의 요소분해효소 항원결정기.

2

제 1항에 따른 항원결정기를 포함하는 헬리코박터 파이로리의 요소분해효소 항원결정기재조합 단백질.

3

제 2항에 있어서,상기 항원결정기는 B 아단위의 3’마지막 도메인에 위치하는 것을 특징으로 하는 헬리코박터 파이로리 요소분해효소 항원결정기재조합 단백질.

4

제 2항에 있어서,서열번호 2의 아미노산 서열로 구성되는 헬리코박터 파이로리의 요소분해효소 항원결정기재조합 단백질.

5

제 2항에 있어서,IgA 항혈청에 반응하는 것을 특징으로 하는 헬리코박터 파이로리 요소분해효소 항원결정기재조합 단백질.

6
  1. 헬리코박터 파이로리 항원 유전자와 결손변이 항원 유전자를 중합효소연쇄반응(PCR)을 통해 DNA를 증폭하는 단계;2) 상기 증폭된 DNA를 서브-클로닝 하여 클론을 얻은 후, 제한효소를 처리하여 DNA를 절단하는 단계;3) 상기 절단된 DNA를 전기영동 하여 분리한 후, DNA를 정제하는 단계;4) 상기 2) 단계에서 처리한 동일한 제한효소를 벡터에 처리하는 단계; 5) 상기 3) 단계의 정제된 DNA와 상기 4) 단계의 벡터를 클로닝 하여 클론을 얻는 단계; 6) 상기 5) 단계의 클론을 단백질 발현시켜 항원성을 검토하고 제 1항의 항원결정기 서열을 맵핑하는 단계;7) 상기 6) 단계의 맵핑된 제 1항의 항원결정기 서열을 중합효소연쇄반응(PCR)을 통해 증폭하고 융합대상 벡터와 클로닝 하여 클론을 얻는 단계; 및8) 상기 7) 단계의 클론을 발현하여 재조합 융합단백질을 정제하는 단계:를 포함하는 제 2항 내지 제5항 중 어느 한 항의 헬리코박터 파이로리 항원결정기요소분해효소 재조합 단백질 제조방법.
7

제 6항에 있어서,상기 2) 단계 또는 4) 단계에서 제한효소는 5′말단은 NdeI를 사용하고, 3′말단은 BamHI, HindIII, ClaI, EcoRI으로부터 선택되어져 사용하는 것을 특징으로 하는 헬리코박터 파이로리 요소분해효소 항원결정기재조합 단백질 제조방법.

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