라이스 캘러스를 이용한 BMP 9 대량 생산 방법
METHOD FOR MASS PRODUCTION OF BMP 9 USING RICE CALLUS
특허 요약
본 발명은 라이스 캘러스에서 라이스 캘러스를 이용한 BMP 9 대량 생산 방법 에 관한 것으로, 구체적으로 상기 생산 방법은 라이스 액틴 1(Rice Actin 1) 프로모터; OsADH 5'UTR; BMP9 유전자 및 HSP 터미네이터를 순서대로 포함하는 벡터로 아그로박테리움 속 균주를 형질전환시키는 단계; 벼 캘러스를 배양하는 단계; 상기 형질전환된 아그로박테리움 속 균주와 상기 벼 캘러스를 배지에서 공동배양하는 단계를 포함하고, 상기 배지는 시클로헥사미드(cycloheximide), 소르비톨(sorbitol), 카제인 가수분해물(Casein hydrolysate) 및 폴리에틸렌 글리콜(PEG 20000)을 포함하는 AA 배지인 것을 특징으로 한다.
청구항
번호청구항
1

라이스 액틴 1(Rice Actin 1) 프로모터; OsADH 5'UTR; BMP9(Bone morphogenetic protein 9) 유전자 및 HSP 터미네이터를 순서대로 포함하는 벡터로 아그로박테리움 속 균주를 형질전환시키는 단계;벼 캘러스를 배양하는 단계;상기 형질전환된 아그로박테리움 속 균주와 상기 벼 캘러스를 배지에서 공동배양하는 단계를 포함하고, 상기 배지는 시클로헥사미드(cycloheximide), 소르비톨(sorbitol), 카제인 가수분해물(Casein hydrolysate) 및 폴리에틸렌 글리콜(PEG 20000)을 포함하는 AA 배지이고, 상기 공동배양은 배양시작일로 6일차까지는 회분배양(batch culture)으로 수행되고, 그 이후에는 유가식 배양 방법으로 수행되는 것을 특징으로 하는, BMP9(Bone morphogenetic protein 9) 단백질 대량 생산 방법.

2

제1항에 있어서, 상기 벡터는 pRI201인 것을 특징으로 하는, BMP9(Bone morphogenetic protein 9) 단백질 대량 생산 방법.

3

제1항에 있어서, 상기 라이스 액틴 1(Rice Actin 1) 프로모터는 서열목록 4; OsADH 5'UTR은 서열목록 5 및 HSP 터미네이터는 서열목록 8의 염기서열을 갖는 것을 특징으로 하는, BMP9(Bone morphogenetic protein 9) 단백질 대량 생산 방법.

4

제1항에 있어서, 상기 시클로헥사미드(cycloheximide) 및 소르비톨(sorbitol)은 각각 2 ~ 8 μg/ml 및 0.1 ~ 0.5 g/L의 농도로 첨가되는 것을 특징으로 하는, BMP9(Bone morphogenetic protein 9) 단백질 대량 생산 방법.

5

제1항에 있어서, 상기 카제인 가수분해물(Casein hydrolysate) 및 폴리에틸렌 글리콜(PEG 20000)은 각각 1 ~ 5 중량% 및 0.1 ~ 1 mg/L의 농도로 첨가되는 것을 특징으로 하는, BMP9(Bone morphogenetic protein 9) 단백질 대량 생산 방법.

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