| 번호 | 청구항 |
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| 1 | a) 분리된 간 조직에서 전체 간세포를 분리하여 전체 간세포를 얻는 단계;b) 상기 전체 간세포를 0.5 X 107 내지 1.5 X 107 cell/ml의 농도로 포함하는 세포 배지를 준비하는 단계;c) 상기 전체 간세포를 포함하는 세포 배지에 ECM(extracellular matrix)을 혼합하여 ECM-세포 혼합물을 얻는 단계;d) 상기 ECM-세포 혼합물을 마이크로필러(micropillar)에 분배(loading)하는 단계;e) 상기 분배된 ECM-세포 혼합물을 포함하는 마이크로필러를 배양 배지가 포함된 웰에 결합 후, 세포를 안정화하여 안정화된 ECM-세포 혼합물을 얻는 단계; 및f) 상기 안정화된 ECM-세포 혼합물을 포함하는 마이크로필러를 새로운 배양 배지가 포함된 웰에 결합하는 단계;를 포함하고,상기 단계 c)의 ECM은 0.5 내지 1.0 (v/v/)% 알지네이트(alginate)인 것을 특징으로 하는, 전체 간세포를 이용한 3차원 세포배양 방법. |
| 2 | 삭제 |
| 3 | 제1항에 있어서, 상기 단계 a)의 전체 간세포는 간세포(hepatocyte), 간 성상 세포(hepatic stellate cell), 쿠퍼 세포(Kupffer cell), 대식세포(macrophage)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 3차원 세포배양 방법. |
| 4 | 제1항에 있어서, 상기 단계 b)의 세포 배지는 HepatoZYME, BCS, 및 Antibiotics을 포함하는 것을 특징으로 하는, 3차원 세포배양 방법. |
| 5 | 제1항에 있어서,상기 단계 c)의 포함하는 전체 간세포를 포함하는 세포 배지 및 ECM은 1:1의 부피비로 혼합하는 것을 특징으로 하는, 3차원 세포배양 방법. |
| 6 | 제1항에 있어서,상기 단계 d)의 마이크로필러(micropillar)에 분배된 ECM-세포 혼합물은 0.5 내지 5 μl인 것을 특징으로 하는, 3차원 세포배양 방법. |
| 7 | 제1항에 있어서, 상기 단계 e)의 배양 배지는 HepatoZYME, BCS, 및 Antibiotics을 포함하는 것을 특징으로 하는, 3차원 세포배양 방법. |
| 8 | 제1항에 있어서, 상기 단계 e)의 세포 안정화는 37℃ 및 5% CO2에서 20 내지 40분 동안 배양하는 것을 특징으로 하는, 3차원 세포배양 방법. |
| 9 | 제1항에 있어서, 상기 단계 f)의 배양 배지는 HepatoZYME, BCS, 및 Antibiotics을 포함하는 인 것을 특징으로 하는, 3차원 세포배양 방법. |
| 10 | 삭제 |
| 11 | 하기를 포함하는 지방 축적 감소 물질의 스크리닝 방법:a) 제1항의 방법으로 제조된 3차원 세포배양 배지를 혼합 지방산이 포함된 배지로 교환하여 배양하여 지방이 축적된 3차원 인공 간 조직을 얻는 단계;b) 상기 3차원 인공 간 조직에 지방 축적 감소 후보물질을 접촉시키는 단계; 및c) 상기 단계 b)의 3차원 인공 간 조직의 지방 또는 지질의 양을 측정하는 단계. |
| 12 | 제11항에 있어서,상기 단계 a)의 혼합 지방산은 포화지방산과 불포화지방산이 1:1 내지 1:3의 비로 혼합된 것이고;상기 포화지방산은 palmitate이고; 및상기 불포화지방산은 oleate인 것을 특징으로 하는, 스크리닝 방법. |
| 13 | 제11항에 있어서,상기 지방간 관련 대사질환은 만성 간염, 간경변증, 인슐린 비의존성, 당뇨병, 이상지질혈증, 비만, 고콜레스테롤혈증, 고지혈증 등을 포함하는 것을 특징으로 하는, 스크리닝 방법. |