자궁-난소 바이오칩
uterus-ovary biochip
특허 요약
본 발명은 독성물질의 스크리닝용으로 사용될 수 있는 자궁-난소 바이오칩, 상기 자궁-난소 바이오칩의 제조방법 및 상기 제조방법으로 제조된 자궁-난소 바이오칩에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명의 자궁-난소 바이오칩 내의 세포들은 배양 14일이 경과하여도 전체 세포의 약 90%가 생존하고, 자궁-난소 바이오칩의 자궁 부분 내의 세포들은 자궁내막 증식의 마커인 프로스타글란딘 E2(PGE2)을 다량 분비하고 프로스타글란딘 E2 수용체(PGE2 receptor)를 높게 발현하며, 자궁-난소 바이오칩의 난소 부분 내의 세포들은 에스트로겐, 프로게스테론을 다량 분비하고 이들의 수용체를 높게 발현하는 효과가 있으며, 여러 생식 독성 물질에 의해 생식 독성 마커인 SERPINB2의 발현이 증가하는 효과를 확인하였으므로, 인간의 자궁과 난소를 생체 외 환경에서 유사하게 구현하여 생식독성물질의 스크리닝 용도로 유용하게 사용될 수 있다.
청구항
번호청구항
1

자궁내막 줄기세포(endometrial stem cell), 섬유아세포(fibroblast) 및 혈관내피세포(vascular endothelial cell)가 1 내지 10% 농도의 콜라겐, 1 내지 10% 농도의 히알루론산 및 0.2 내지 2% 농도의 아가로오스에 혼합되어 있는 자궁 유사체(uterus-like) 부분;난소 과립막 세포(granulosa cell) 및 난포막 세포(theca cell)를 포함하는난소 유사체(ovary-like) 부분; 및상기 자궁 유사체 부분과 난소 유사체 부분을 연결하는 부분;을 포함하는 것을 특징으로 하는, 자궁-난소 바이오칩.

2

제1항에 있어서, 상기 자궁내막 줄기세포, 섬유아세포 및 혈관내피세포는 1×104 내지 1×106 개 시딩(seeding)되는 것을 특징으로 하는, 자궁-난소 바이오칩.

3

제1항에 있어서, 상기 난소 과립막 세포 및 난포막 세포는 1×104 내지 1×106 개 시딩(seeding)되는 것을 특징으로 하는, 자궁-난소 바이오칩.

4

제1항에 있어서, 상기 바이오칩은 생식독성물질 스크리닝용인 것을 특징으로 하는, 자궁-난소 바이오칩.

5

제4항에 있어서, 상기 생식독성물질 스크리닝은 SERPINB2(Serpin Family B Member 2) 마커를 사용하여 수행되는 것인, 자궁-난소 바이오칩.

6

제1항에 있어서, 상기 자궁 유사체 부분은 프로스타글란딘 E2(PGE2)를 분비하는 것을 특징으로 하는, 자궁-난소 바이오칩.

7

제1항에 있어서, 상기 자궁 유사체 부분은 프로스타글란딘 E2 수용체(PGE2 receptor)를 발현하는 것을 특징으로 하는, 자궁-난소 바이오칩.

8

제1항에 있어서, 상기 난소 유사체 부분은 에스트로겐을 분비하는 것을 특징으로 하는, 자궁-난소 바이오칩.

9

제1항에 있어서, 상기 난소 유사체 부분은 프로게스테론을 분비하는 것을 특징으로 하는, 자궁-난소 바이오칩.

10

제1항에 있어서, 상기 난소 유사체 부분은 에스트로겐 수용체를 발현하는 것을 특징으로 하는, 자궁-난소 바이오칩.

11

제1항에 있어서, 상기 난소 유사체 부분은 프로게스테론 수용체를 발현하는 것을 특징으로 하는, 자궁-난소 바이오칩.

12
  1. 자궁-난소 바이오칩의 플랫폼을 제작하는 단계;2) 상기 단계 1)의 플랫폼에서 상단의 반타원형으로 이루어진 웰 내에 난소 과립막 세포(granulosa cell) 및 난포막 세포(theca cell)를 시딩(seeding)하는 단계; 및3) 상기 단계 1)의 플랫폼에서 하단의 삼각형으로 이루어진 웰 내에 자궁내막 줄기세포(endometrial stem cell), 섬유아세포(fibroblast) 및 혈관내피세포(vascular endothelial cell)가 1 내지 10% 농도의 콜라겐, 1 내지 10% 농도의 히알루론산 및 0.2 내지 2% 농도의 아가로오스에 혼합되어 있는 혼합물을 주입하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는, 자궁-난소 바이오칩의 제조방법.
13

제12항에 있어서, 상기 단계 1)의 자궁-난소 바이오칩의 주형은 폴리디메틸실록세인(polydimethylsiloxane, PDMS), 폴리락틱애씨드(polylacticacid, PLLA), 폴리올레핀계(polyolefin), 폴리테트라플루오로에틸렌(polytetrafluoroethylene, PTFE), 폴리에틸렌테레프탈레이트(poly(ethylene terephthalate), PET), 폴리메틸메타아크릴산중합체(poly(methyl methacrylate), PMMA) 또는 폴리우레탄(polyurethane)으로 제작하는 것을 특징으로 하는, 자궁-난소 바이오칩의 제조방법.

14

제12항 또는 제13항의 제조방법에 의해 제조되는 것을 특징으로 하는 자궁-난소 바이오칩.

15

두 쌍의 반원형 웰로 구성되는 상단부;삼각형 형태의 웰로 구성되는 하단부;상기 상단부의 두 쌍의 반원형 웰과 하단부의 삼각형 형태의 웰을 각각 연결하는 직사각형 형태의 웰;상기 반원형 웰 중 한 쌍의 반원형 웰의 내부에 난소 과립막 세포(granulosa cell)를, 나머지 한 쌍의 반원형 웰의 내부에는 난포막 세포(theca cell)를 포함하는 난소 유사체 부분; 및상기 삼각형 형태의 웰 내부에 자궁내막 줄기세포(endometrial stem cell), 섬유아세포(fibroblast) 및 혈관내피세포(vascular endothelial cell)가 1 내지 10% 농도의 콜라겐, 1 내지 10% 농도의 히알루론산 및 0.2 내지 2% 농도의 아가로오스에 혼합되어 있는 혼합물을 포함하는 자궁 유사체 부분; 으로 구성되는 것을 특징으로 하는, 자궁-난소 바이오칩.