구성단백질이 인삼 메이저 라텍스 유사 단백질(major latex like protein; MLP151)과 인삼 리보뉴클레아제 유사 메이저 저장 단백질(RNAse like major storage protein)로 이루어지는 인삼에서 분리한 당지질단백질 진토닌(gintonin) 조성물로서,체외에서 리소포스파트산(lysophosphatic acid, LPA) 수용체에 결합하는 리간드로 사용하기 위한 조성물.

제 1 항에 있어서,상기 인삼 메이저 라텍스 유사 단백질(major latex like protein; MLP151)은 서열번호 1 내지 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는,체외에서 리소포스파트산(lysophosphatic acid, LPA) 수용체에 결합하는 리간드로 사용하기 위한 조성물.

제 1 항에 있어서,상기 인삼 메이저 라텍스 유사 단백질(major latex like protein; MLP151)은 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어지고, 세 곳의 N-글리코실화 부위(N-glyco sylation site)를 갖는 것을 특징으로 하는,체외에서 리소포스파트산(lysophosphatic acid, LPA) 수용체에 결합하는 리간드로 사용하기 위한 조성물.

제 1 항에 있어서,상기 인삼 리보뉴클레아제 유사 메이저 저장 단백질(RNAse like major storage protein)은 서열번호 6 내지 10의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는,체외에서 리소포스파트산(lysophosphatic acid, LPA) 수용체에 결합하는 리간드로 사용하기 위한 조성물.

제 1 항에 있어서,상기 인삼 리보뉴클레아제 유사 메이저 저장 단백질(RNAse like major storage protein)은 서열번호 11의 아미노산 서열로 이루어지는 것을 특징으로 하는,체외에서 리소포스파트산(lysophosphatic acid, LPA) 수용체에 결합하는 리간드로 사용하기 위한 조성물.

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(1) LPA 계통(family) 수용체 유전자를 포함하고 있는 플라스미드(plasmids)와 상기 수용체를 포함하지 않은 공플라스미드(empty plasmid)의 증폭 및 정제과정(maxi-preparation)을 통하여 공벡터(empty vector)와 LPA 계통 수용체를 포함하는 유전자를 다량으로 확보하는 단계; (2) Haematoglutin(HA)이 태그된 LPA(tagged-LPA) 수용체를 B103 세포에 트랜스펙션 시켜 발현한 후 HA에 대한 일차 항체 및 일차항체에 대한 이차항체로서 horseradish peroxidase(HRP)로 컨쥬게이션 된 이차 항체를 이용하여 발색 반응을 유도하는 웨스턴 블롯팅(western blotting)을 실시하여 LPA 수용체 단백질 발현을 검증하는 단계; (3) Haematoglutin(HA)이 태그된 LPA 수용체를 트랜스펙션 시켜 발현한 후 HA에 대한 일차항체 및 형광 물질인 Cy3-컨쥬게이션 된 이차항체를 이용하여 이들 수용체 단백질의 발현을 동초점 레이저 현미경(confocal laser microscopy)를 이용하여 검증하는 단계;(4) 상기 공플라스미드와 각각의 LPA family 수용체를 포함하는 플라스미드를 B103 세포에 트랜스펙션(transfection)하는 단계; (5) 2~3일 후 트랜스펙션된 B103 세포에 트립신(0.05% trypsin with EDTA, w/v)을 처리하여 배양 플라스크로부터 세포 현탁액(suspension)을 준비하는 단계; (6) 현탁된 세포에 Fura-2(2.5 μM)를 처리하여 배양하는 단계; 및 (7) Fura-2를 함유하는 현탁된 세포들을 포함하는 큐벳에 진토닌을 처리하여 세포질내 유리 Ca2+(Free Ca2+)의 증가를 분광형광광도계(spectrofluorophotometer)로 확인하여 세포내 증가된 칼슘의 양을 정량하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 진토닌과 LPA 수용체와의 상호작용 확인 방법.

제 9항에 있어서,상기에 더하여,(8) 진토닌을 처리하기 전에 LPA 수용체 길항제(antagonist) 및 신호전달 관련 약물들(예컨대, 백일해 독소(pertussis toxin), PLC 억제제(inhibitor), IP3 수용체 길항제(receptor antagonist)를 전처리한 후 진토닌에 의한 세포질내 유리 Ca2+(Free Ca2+)의 증가를 작용을 차단하거나 줄이는 것을 검증하는 단계; (9) 진토닌이 LPA 수용체 단백질의 어느 아미노산과 상호작용하여 LPA 수용체를 활성시키는 가를 위치지정돌연변이(site-directed mutagenesis) 방법을 이용하여 확인하기 위한 단계; 및 (10) LPA 수용체 외에 LPA가 활성시키는 것으로 알려진 다른 고아 GPCR(orphan GPCR)인 GPR35 과 GPR87 및 지방산 GPCR(free fatty acid GPCR)인 GPR40, GPR41, GPR43 및 GPR120을 진토닌이 활성시키는지 여부를 검증하는 단계;를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 진토닌과 LPA 수용체와의 상호작용 확인 방법.

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인삼 유래의 당지질단백질 진토닌 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는 상처치유용 약학 조성물.

인삼 유래의 당지질단백질 진토닌 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는 혈관평활근 증식(vascular smooth muscle proliferation) 예방 및 치료를 위한 약학 조성물.

제 14항에 있어서,상기 혈관평활근 증식(vascular smooth muscle proliferation)은 수술 후 혈관 협착증 또는 재발협착증인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.

인삼 유래의 당지질단백질 진토닌 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는 염증(inflammation) 예방 및 치료를 위한 약학 조성물.

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