벼에서 분리한 당전이효소 유전자를 포함하는 대장균을이용한 플라보놀 3-O-배당체 생산 방법
Production method of Flavonol 3-O-glucoside by using E.Coli containing glycosyltransferase gene from Oryzasativa
특허 요약
본 발명은 벼 ( Oryza sativa )에서 분리한 당전이효소 (glycosyltransferase), 그의 유전자 및 그들의 제조방법, 상기 당전이효소를 생산할 수 있는 재조합 발현 벡터 및 형질전환 미생물과 상기 형질전환 미생물을 이용한 플라보놀 (flavonol)의 3번 탄소의 수산기 대신에 한 분자의 글루코스 (glucose, 포도당)가 결합된 형태인 플라보놀 3-O-배당체 (flavonol 3-O-glucoside)의 생산 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 당전이효소의 제조방법은 대사산물의 원하는 위치에 당을 부착하는데 이용될 수 있고, 또한 이로부터 생산된 플라보놀 배당체 등은 세포 독성은 감소하고, 용해도와 화학적 안정성은 증가하여 생체 내 섭취 및 흡수가 용이할 뿐만 아니라 저장성도 우수하여 산업적으로 널리 적용될 수 있다. 플라보놀, 당전이효소, 대장균, 배당체, 생산 방법
청구항
번호청구항
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제 5 항에 있어서,상기 (2) 과정에 더하여 상기 당전이효소의 기질을 배지에 첨가하여 당을 부착하는 과정을 추가하는 것을 특징으로 하는 당전이효소의 제조방법.

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벼 (Oryza sativa)에서 분리한 당전이효소 (glycosyltransferase) 유전자.

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제 1 항에 있어서, 서열번호 3의 염기 서열을 일부 또는 전부 포함하는 것을 특징으로 하는 당전이효소 유전자.

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제 1 항의 당전이효소 유전자를 포함하는 재조합 발현 벡터 pGEX (Glycosyltransferase).

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제 3 항의 재조합 발현 벡터로 형질전환된 대장균 Escherichia coli UGT6 균주 (기탁번호: KACC 95053P).

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(1) 제 1 항의 당전이효소 유전자를 포함하는 재조합 발현 벡터로 형질전환된 미생물을 배양하고;(2) 상기 효소 단백질의 발현을 유도하고; 및(3) 상기 효소 단백질을 분리 정제하는; 과정으로 이루어진 당전이효소의 제조방법.

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제 6 항에 있어서,상기 기질로 플라보놀을 사용하고, 상기 당원으로는 글루코스 (glucose, 포도당)를 사용하여 플라보놀 3-O-배당체 (flavonol 3-O-glucoside)를 얻는 것을 특징으로 하는 당전이효소의 제조방법.

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제 5 항 내지 제 7 항에 있어서,상기 (1) 과정에서 상기 재조합 발현 벡터로는 제 3 항의 재조합 발현 벡터를 사용하고, 상기 미생물로는 제 4 항의 형질전환된 대장균을 사용하는 것을 특징으로 하는 당전이효소의 제조방법.

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(1) 당전이효소 유전자를 포함하는 재조합 발현 벡터로 혈질전환된 미생물을 배양하고;(2) 상기 효소 단백질의 발현을 유도하고; 및(3) 상기 효소의 기질을 배지에 첨가하여 당을 부착하는l 과정으로 이루어진 배당체의 생산방법.

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제 9 항에 있어서,상기 (3) 과정에서 기질로 플라보놀을 사용하고, 상기 당원으로 글루코스 (포도당)를 첨가하여 플라보놀 3-O-배당체 (flavonol 3-O-glucoside)를 얻는 것을 특징으로 하는 배당체의 생산방법.

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제 9 항 또는 제 10 항에 있어서,상기 (1) 과정에서 상기 재조합 발현 벡터는 제 3 항의 재조합 발현 벡터를 사용하고, 상기 미생물은 제 4 항의 형질전환 대장균을 사용하는 것을 특징으로 하는 배당체의 생산방법.