산화질소생성능의 활성 평가방법
A METHOD FOR ESTIMATION OF NITRIC OXIDE SYNTHASE ACTIVITY
특허 요약
본 발명은 15 N 4 -아르기닌이 포함된 배양배지에서 세포를 배양하는 세포 배양단계; 상기 배양된 세포의 세포 용해물에 표준시료인 D 4 -시트룰린을 첨가하여 시료를 제조하는 시료 제조단계; 상기 제조된 시료를 LC-MS/MS 분석법으로 분석하는 단계를 포함하는 산화질소생성능의 활성 평가방법에 관한 것으로, 본 발명은 기존 방법에 비하여, 정량적인 측정이 가능하고, 우수한 감도를 가지며, 대사경로를 예측할 수 있을 뿐만 아니라, 기존 방사성 동위원소를 이용하여 방사능(radioactivity)을 측정하는 방법에 비하여, 안전성이 우수하고, 신뢰성이 높다는 장점이 있으며, 추가적으로 산화질소생성능 뿐만 아니라 아르기닌이나 디메틸아르기닌(dimethylarginine)과 같은 관련 아미노산들을 동시에 정량할 수 있다는 장점이 있다.
청구항
| 번호 | 청구항 |
|---|---|
| 1 | 15N4-아르기닌이 포함된 배양배지에서 세포를 배양하는 세포 배양단계;상기 배양된 세포의 세포 용해물에 표준시료인 D4-시트룰린을 첨가하여 시료를 제조하는 시료 제조단계;상기 제조된 시료를 LC-MS/MS 분석법으로 분석하는 단계;를 포함하는 산화질소생성능의 활성 평가방법. |
| 2 | 제1항에 있어서,상기 시료 제조단계는 상기 배양된 세포의 세포 용해물에 표준시료인 D4-시트룰린을 첨가하는 과정; 상기 D4-시트룰린을 첨가한 후, 아세트산(acetic acid) 및 트리플로로아세트산(trifluoroacetic acid)이 포함된 아세트니트릴(acetonitrile) 용액을 첨가하는 과정 및 상기 아세트니트릴 용액을첨가한 후, 원심분리를 수행하여 상등액을 수집하는 과정을 포함하는 방법으로 수행하는 것을 특징으로 하는 산화질소생성능의 활성 평가방법. |
| 3 | 제2항에 있어서,상기 LC-MS/MS 분석법으로 분석하는 단계는 상기 제조된 시료를 아세트산 및 트리플로로아세트산이 포함된 수용액인 이동상 A(15%)와 아세트산 및 트리플로로아세트산이 포함된 아세트니트릴 용액인 이동상 B(85%)를 이용하여 등용매분리(isocratic elution)하면서, 질량전이(mass transition, m/z) 179.2 → 71.1에서 다중반응모니터링(MRM, multiple reaction monitoring) 방식으로 시투룰린을 질량분석하는 방법으로 수행하는 것이 특징인 산화질소생성능의 활성 평가방법. |
