신규한 코마린 유도체, 이의 제조방법 및 상기 코마린 유도체를 포함하는 형광 면역측정용 키트
Novel coumarin derivatives, process for the preparation thereof, and kits comprising the coumarin derivatives for fluorescent immunosorbant assay
특허 요약
본 발명은 신규한 코마린 유도체, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 형광 면역측정용 키트에 관한 것이다. 본 발명에 따른 코마린 유도체와 이를 포함한 형광 면역측정용 키트는 높은 특이성과 민감도를 가지므로 다양한 질병의 진단이 가능하며 특히 정량적 분석이 가능하므로 인플루엔자 바이러스 A형 진단은 물론 수치적 분석이 중요한 심혈관 질환 및 암과 같은 질환의 진단에 유용하게 사용될 수 있고 이와 같이 수치화가 가능하므로 U-health 시스템과 연계되어서 중앙 모니터링 시스템으로 활용할 수도 있다.
청구항
번호청구항
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제15항에 있어서, 상기 형광면역측정용 키트는 인플루엔자 바이러스 A형 H1N1 아종 또는 H5N3 아종의 진단을 위해 사용되는 것을 특징으로 하는 키트.

15

제14항에 따른 화학식 10의 코마린(coumarin) 유도체가 축합된 항체를 포함하는 형광면역측정용 키트.

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제15항에 있어서, 상기 형광면역측정용 키트는 신속 형광 면역크로마토그래피법 또는 형광 면역측정법(FLISA)에 사용되는 것을 특징으로 하는 키트.

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제12항에 있어서, 상기 화학식 3의 화합물은 에틸 시아노아세테이트(ethyl cyanoacetate)와 상기 화학식 11의 화합물의 혼합물을 용매 없이 120℃에서 반응시킴으로써 수득되는 것을 특징으로 하는 방법.

1

하기 화학식 10의 화합물인 코마린(coumarin) 유도체 또는 이의 염:[화학식 10].

2

삭제

3
  1. 하기 화학식 2의 화합물과 하기 화학식 3의 화합물을 반응시켜 하기 화학식 4의 화합물을 형성하는 단계;2) 하기 화학식 4의 화합물과 테트라뷰틸암모니움 브로마이드(tetrabutylammonium bromide) 및 염화제일주석이수화물(SnCl2 dihydrate)을 반응시켜 하기 화학식 5의 화합물을 형성하는 단계; 및3) 하기 화학식 5의 화합물과 티오카보닐 디이미다졸(thiocarbonyl diimidazole)을 반응시켜 제1항에 따른 화학식 10의 화합물을 형성하는 단계를 포함하는 제1항에 따른 화학식 10의 코마린(coumarin) 유도체를 제조하는 방법:[화학식 2][화학식 3][화학식 4][화학식 5].
4

제3항에 있어서, 상기 1) 단계에서 상기 화학식 4의 화합물은 화학식 2의 화합물을 에탄올에 녹인 후 화학식 3의 화합물과 피페리딘을 반응시킴으로써 수득되는 것을 특징으로 하는 방법.

5

제3항에 있어서, 상기 2) 단계에서 상기 화학식 5의 화합물은 화학식 4의 화합물과 테트라뷰틸암모니움 브로마이드 및 염화제일주석이수화물을 혼합한 후 90℃에서 가열함으로써 수득되는 것을 특징으로 하는 방법.

6

제3항에 있어서, 상기 3)단계에서 상기 화학식 10의 화합물은 화학식 5의 화합물을 디클로로메탄에 녹인 후 티오카보닐 디이미다졸을 반응시킴으로써 수득되는 것을 특징으로 하는 방법.

7

제3항에 있어서, 상기 화학식 2의 화합물은a) 하기 화학식 6의 화합물의 카복실산과 페놀 그룹을 메틸레이션시켜 하기 화학식 7의 화합물을 형성하는 단계;b) 하기 화학식 7의 화합물과 디이소부틸알루미늄하이드라이드( Diisobutylaluminium hydride, DIBAL)를 반응시켜 하기 화학식 8의 화합물을 형성하는 단계;c) 하기 화학식 8의 화합물과 피리디늄 디크로메이트(pyridinium dichromate, PDC)를 반응시켜 하기 화학식 9의 화합물을 형성하는 단계; 및d) 하기 화학식 9의 화합물과 브롬화 화합물을 반응시켜 상기 화학식 2의 화합물을 형성하는 단계를 포함하는 방법에 의해 수득되는 것을 특징으로 하는 방법:[화학식 6][화학식 7][화학식 8][화학식 9].

8

제7항에 있어서, 상기 a) 단계에서 화학식 7의 화합물은 화학식 6의 화합물을 아세톤에 녹인 후 포타슘카보네이트(K2CO3) 및 디메틸설페이트(dimethyl sulfate)를 반응시킴으로써 수득되는 것을 특징으로 하는 방법.

9

제7항에 있어서, 상기 b) 단계에서의 화학식 8의 화합물은 상기 화학식 7의 화합물을 테트라히드로퓨란에 녹인 후 0℃로 냉각하고 디이소부틸알루미늄하이드라이드를 반응시킴으로써 수득되는 것을 특징으로 하는 방법.

10

제7항에 있어서, 상기 c) 단계에서의 화학식 9의 화합물은 상기 화학식 8의 화합물을 디클로로메탄에 녹인 후 피리디늄 디크로메이트를 반응시키고 40℃에서 가열함으로써 수득되는 것을 특징으로 하는 방법.

11

제7항에 있어서, 상기 d) 단계에서의 화학식 2의 화합물은 상기 화학식 9의 화합물을 디클로로메탄에 녹인 후 냉각시켰다가 BBr3 을 반응시킨 후 반응 온도를 상온으로 상승시킴으로써 수득되는 것을 특징으로 하는 방법.

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제3항에 있어서, 상기 화학식 3의 화합물은 에틸 시아노아세테이트(ethyl cyanoacetate)와 하기 화학식 11의 화합물을 반응시킴으로써 수득되는 것을 특징으로 하는 방법:[화학식 11].

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제1항에 따른 화학식 10의 코마린(coumarin) 유도체가 축합된 항체.

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하기 단계를 포함하는 제14항에 따른 화학식 10의 코마린 유도체가 축합된 항체를 이용하여 형광 면역분석(FLISA)법에 의해 인플루엔자 바이러스 A형 H1N1 아종 또는 H5N3 아종을 검출하기 위한 정보제공방법:제1항체를 형광 면역분석용 플레이트에 넣고 고정화시키는 단계;상기 FLISA용 플레이트에 분석 대상 시료를 넣고 제14항에 따른 화학식 10의 코마린 유도체가 축합된 제2항체를 이동상으로 반응시키는 단계; 및여기 파장(Excitation)에서 상기 화학식 10의 코마린 유도체를 여기시킨 후 발현하는 형광을 측정하는 단계.

19

하기 단계를 포함하는 제14항에 따른 화학식 10의 코마린 유도체가 축합된 항체를 이용하여 신속 형광 면역크로마토그래피법에 의해 인플루엔자 바이러스 A형 H1N1 아종 또는 H5N3 아종을 검출하기 위한 정보제공방법:신속 형광 면역크로마토그래피 스트립의 막에 제1항체를 고정시키고 축합패드에는 제14항에 따른 화학식 10의 코마린 유도체가 축합된 제2항체를 처리하는 단계; 상기 신속 형광 면역크로마토그래피 스트립에 분석 대상 시료를 반응시키는 단계; 및여기 파장(Excitation)에서 상기 화학식 1O의 코마린 유도체를 여기시킨 후 발현하는 형광을 측정하는 단계.