효모 세포 고정화 기술을 이용한 기능성 다이펩타이드 생산방법
Method for producing functional diepetide by immobilized enzyme on yeast cell surface
특허 요약
본 발명은 효모 세포 고정화 기술을 이용한 기능성 Ala-Gln 다이펩타이드(dipeptide) 생산방법에 관한 것으로서, Ala-Gln 다이펩타이드는 안정성, 용해도, 생체이용률 등 다양한 장점을 지닌 새로운 영양보충제가 될 수 있는 고부가가치 펩타이드이고, 전세포 생체 촉매의 일종인 효소 세포 표면 고정화 시스템을 통해 표적 단백질이 효모 세포 표면에 발효 및 고정될 수 있으며 효소의 안정성이 향상되고 회수 과정이 단순화되므로 특히 대규모 산업 응용에 적합하다. 이에 본 발명은 Ala-Gln의 깨끗하고 효율적인 생체 촉매 생산을 위해, 스핑고박테리움 시양겐시스(Sphingobacterium siyangensis) SY1에서 유래된 α-아미노산 에스테르 아실트랜스퍼라제(α-amino acid ester acyltransferase; SsAet)를 사카로마이세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae) 세포 표면에 고정화한 균주(AET)를 개발하였다.
청구항
번호청구항
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제5항에 있어서, 상기 배양된 재조합 효모 균주의 세포 농도는 5 내지 50 g DCW/L인 것을 특징으로 하는 Ala-Gln 다이펩타이드(dipeptide) 생산방법.

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제5항에 있어서, 상기 기질 내 AlaOMe/Gln 비율은 1/1 내지 1/3인 것을 특징으로 하는 Ala-Gln 다이펩타이드(dipeptide) 생산방법.

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CCW12 프로모터 유전자, Mfα1 신호 펩타이드 유전자, 스핑고박테리움 시양겐시스(Sphingobacterium siyangensis) SY1 유래 α-아미노산 에스테르 아실트랜스퍼라제(α-amino acid ester acyltransferase; SsAet) 유전자, Sed1 앵커(anchor) 유전자 및 CYC1 터미네이터(terminator) 유전자를 포함하는 세포 표면 발현 카세트(expression cassette)가 효모 균주 게놈에 통합된, L-알라닐-L-글루타민(L-alanyl-L-glutamine; Ala-Gln) 다이펩타이드(dipeptide) 생산용 재조합 효모 균주.

2

제1항에 있어서, 상기 재조합 균주는 SsAet를 효모 세포의 표면에 발현하는 것을 특징으로 하는 재조합 효모 균주.

3

제1항에 있어서, 상기 Mfα1 신호 펩타이드 유전자는 서열번호 1로 표시되고, 상기 SsAet 유전자는 서열번호 2로 표시되며, 상기 Sed1 앵커(anchor) 유전자는 서열번호 3으로 표시되는 것을 특징으로 하는 재조합 효모 균주.

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제1항에 있어서, 상기 효모 균주는 사카로마이세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae)인 것을 특징으로 하는 재조합 효모 균주.

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제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 재조합 효모 균주를 배양하는 단계; 및L-알라닌 메틸 에스테르 하이드로클로라이드(AlaOMe) 및 L-글루타민(Gln)을 기질로 하여, 상기 배양된 재조합 효모 균주와 촉매 반응시키는 단계를 포함하는 Ala-Gln 다이펩타이드(dipeptide) 생산방법.

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제5항에 있어서, 상기 촉매 반응은 pH 7.0 내지 8.5에서 반응시키는 것을 특징으로 하는 Ala-Gln 다이펩타이드(dipeptide) 생산방법.

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제5항에 있어서, 상기 기질은 AlaOMe 및 Gln이 포함된 인산나트륨 완충액 용액인 것을 특징으로 하는 Ala-Gln 다이펩타이드(dipeptide) 생산방법.

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제7항에 있어서, 상기 용액에 포함된 AlaOMe는 pH 8.0으로 조절한 후에 첨가되는 것을 특징으로 하는 Ala-Gln 다이펩타이드(dipeptide) 생산방법.

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제5항에 있어서, 상기 촉매 반응은 1 내지 6시간 동안 반응시키는 것을 특징으로 하는 Ala-Gln 다이펩타이드(dipeptide) 생산방법.