| 번호 | 청구항 |
|---|---|
| 1 | 프로모터, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 터미네이터(terminator), 목적 단백질을 암호화하는 핵산 서열 및 앵커(anchor) 단백질을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 세포 표면 디스플레이용 발현 카세트(expression cassette). |
| 2 | 제 1항에 있어서, 프로모터, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 제 1 gRNA 표적 서열 및 터미네이터를 포함하는 제 1 발현 카세트; 및목적 단백질을 암호화하는 핵산 서열 및 앵커 단백질을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 제 2 발현 카세트를 포함하는, 세포 표면 디스플레이용 발현 카세트. |
| 3 | 제 1항에 있어서, 프로모터는 pTDH3, pENO2, pTEF-KI, pTEF3, pTEF1, pADH1, pGMP1, pFBA1, pPDC1, pCCW12 또는 pGK1인, 세포 표면 디스플레이용 발현 카세트. |
| 4 | 제 1항에 있어서, 신호 펩타이드는 PEP4(Proteinase A), CPY(carboxypeptidase Y), DAP2 또는 MFα1(α-factor mating) (mitochondrial signal peptide)인, 세포 표면 디스플레이용 발현 카세트. |
| 5 | 제 1항에 있어서, 터미네이터는 TCYC1인, 세포 표면 디스플레이용 발현 카세트. |
| 6 | 제 1항에 있어서, 앵커 단백질은 AGA2, CWP1, CWP2, SED1, PIR1 또는 TIR1인, 세포 표면 디스플레이용 발현 카세트. |
| 7 | 제 1항에 있어서, 목적 단백질은 모노머성, 멀티머성 또는 이 둘을 포함하는 것인, 세포 표면 디스플레이용 발현 카세트. |
| 8 | 제 1항에 있어서, 목적 단백질은 효소, 효소저해제, 호르몬, 호르몬 유사체, 호르몬 수용체, 신호전달 단백질, 항체, 단일클론 항체, 항원, 부착 단백질, 구조 단백질, 조절 단백질, 독소 단백질, 사이토카인, 전사조절 인자, 성장 인자, 면역 자극 단백질, 혈액 응고인자 또는 생체 방어 유도 단백질인, 세포 표면 디스플레이용 발현 카세트. |
| 9 | 제 1항에 있어서, 목적 단백질은 형광 단백질 또는 엔도 이눌리네이즈(endo-inulinase)인, 세포 표면 디스플레이용 발현 카세트. |
| 10 | 제 1항의 발현 카세트를 포함하는, 세포 표면 디스플레이용 재조합 벡터. |
| 11 | 제 1항의 발현 카세트가 미생물의 유전자에 통합된 재조합 미생물. |
| 12 | 제 11항에 있어서, 미생물은 재조합 박테리아 또는 효모인 재조합 미생물. |
| 13 | 제 11항에 있어서, 대장균, 살모넬라 타이피, 살모넬라 타이피뮤리움, 비브리오 콜레라, 마이코박테리움 보비스, 시겔라, 스테필로코커스, 코리네 박테리아, 리스테리아 모노싸이토제네스, 스트랩토코커스, 락토바실러스 에시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus delbruecki ssp. Bulgaricus), 락토바실러스 헬베티쿠스(Lactobacillus helveticus), 락티카제이바실러스 카제이 (Lacticaseibacillus casei), 락티카제이바실러스 파라카제이 (Lacticaseibacillus paracasei), 락티카제이바실러스 람노서스(Lacticaseibacillus rhamnosus), 리모시락토바실러스 퍼멘텀(Limosilactobacillus fermentum), 리모시락토바실러스 루테리(Limosilactobacillus reuteri), 락티플란티바실러스 플란타럼(Lactiplantibacillus plantarum), 리기락토바실러스 살리바리우스(Ligilactobacillus salivarius), 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis), 엔테로코커스 패시움(Enterococcus faecium), 비피도박테리움 비피둠(Bifidobacterium bifidum), 비피도박테리움 브레브(Bifidobacterium breve), 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum), 비피도박테리움 아니말리스 락티스(Bifidobacterium animalis ssp. lactis), 라티락토바실러스 커바투스(Latilactobacillus curvatus), 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 또는 사카로마이세스 보울라디(Saccharomyces boulardii)인, 재조합 미생물. |
| 14 | 제 11항에 있어서, 엔도 이눌리네이즈(endo-inulinase)를 세포의 표면에 디스플레이하는 재조합 미생물. |
| 15 | 제 11항에 있어서, 프리바이오틱스(prebiotics)를 생산하는 재조합 미생물. |
| 16 | 제 11항의 재조합 미생물, 이의 파쇄물, 이의 배양액, 이의 발효물, 상기 배양액의 농축액, 상기 배양액의 건조물 또는 이들의 혼합물을 포함하는 프로바이오틱스 조성물. |
| 17 | 제 14항의 재조합 미생물 및 기질인 이눌린을 포함하는 신바이오틱스 조성물. |
| 18 | 제 14항의 재조합 미생물 및 이눌린(inulin)을 포함하는 프락토올리고당(Fructooligosaccharide) 생산용 조성물. |
| 19 | 제 11항의 재조합 미생물을 배양하는 단계; 및 목적 단백질을 분리 및 정제하는 단계를 포함하는, 목적 단백질을 생산하는 방법. |
| 20 | 제 14항의 재조합 미생물을 촉매로 이용하여 배양액에 존재하는 이눌린을 재조합 미생물의 세포 표면에서 프락토올리고당으로 생물전환(bioconversion)시키는 방법. |
| 21 | 제 14항의 재조합 미생물을 포함하는 용액에 이눌린을 처리하는 단계를 포함하는 프락토올리고당 생산 방법. |
| 22 | 제 1항의 세포 표면 디스플레이용 발현 카세트를 CRISPR-Cas9 시스템을 이용하여 미생물의 유전자에 통합시키는 단계를 포함하는, 목적 단백질이 세포 표면에 디스플레이(display)된 재조합 미생물을 제조하는 방법. |
| 23 | 제 12항에 있어서, 1) Cas9 단백질을 암호화하는 플라스미드를 미생물에 도입하고 선별하는 단계; 2) 미생물의 유전자간부위(intergenic region)를 표적화하는 제 2 gRNA를 포함하는 플라스미드를 이용하여, 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 제 1 gRNA 표적 서열 및 터미네이터를 포함하는 제 1 발현 카세트를 미생물의 유전자간부위에 통합하는 단계; 및3) 제 1 gRNA를 포함하는 플라스미드를 이용하여 목적 단백질을 암호화하는 핵산 서열 및 앵커 단백질을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 제 2 발현 카세트를 제 1 gRNA 표적 서열에 통합하는 단계를 포함하는, 목적 단백질이 세포 표면에 디스플레이된 재조합 미생물을 제조하는 방법. |