엘라스틴 유사 폴리펩타이드 융합 단백질에 기초한 응집 분산 크로마토그래피
AGGREGATION DISPERSION CHROMATOGRAPHY BASED ON ELASTIN-LIKE POLYPEPTIDE FUSION PROTEIN
특허 요약
본 발명은 엘라스틴 유사 폴리펩타이드가 융합된 목적 단백질의 정제 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 목적 단백질의 말단에 엘라스틴 유사 폴리펩타이드가 결합된 융합 단백질을 포함하는 시료를 컬럼에 통과시켜 상기 컬럼에 상기 융합 단백질을 결합시키는 제1단계; 상기 컬럼을 20℃ 내지 65℃로 승온하는 제2단계; 및 상기 컬럼에 세척 완충액을 통과시켜 융합 단백질 이외의 물질을 컬럼으로부터 제거하는 제3단계를 포함함으로써 목적 단백질의 수득률 및 순도가 개선되는, 엘라스틴 유사 폴리펩타이드가 융합된 단백질의 정제 방법에 관한 것이다.
청구항
번호청구항
3

청구항 2에 있어서, 상기 컬럼에 용출 완충액을 통과시켜 상기 융합 단백질을 수득하는 제5단계를 더 포함하는, 목적 단백질의 정제 방법.

4

청구항 1에 있어서, 제1단계에서 상기 컬럼의 온도는 상기 엘라스틴 유사 폴리펩타이드의 전이온도 미만인, 목적 단백질의 정제 방법.

2

청구항 1에 있어서, 상기 컬럼을 다시 제1단계의 온도로 냉각하는 제4단계를 더 포함하는, 목적 단백질의 정제 방법.

1

목적 단백질의 말단에 엘라스틴 유사 폴리펩타이드가 결합된 융합 단백질을 포함하는 시료를 컬럼에 통과시켜 상기 컬럼에 상기 융합 단백질을 결합시키는 제1단계;상기 컬럼을 20℃ 내지 65℃로 승온하는 제2단계; 및상기 컬럼에 세척 완충액을 통과시켜 융합 단백질 이외의 물질을 컬럼으로부터 제거하는 제3단계를 포함하는 상기 목적 단백질의 정제 방법.

5

청구항 1에 있어서, 상기 엘라스틴 유사 폴리펩타이드는 아미노산 Val-Pro-Gly-Ile-Gly의 반복단위를 40 내지 50회 포함하는 것인, 목적 단백질의 정제 방법.

6

청구항 1에 있어서, 상기 엘라스틴 유사 폴리펩타이드는 3 내지 15개의 아미노산으로 구성되는 링커로 상기 목적 단백질의 말단에 결합된 것인, 목적 단백질의 정제 방법.

7

청구항 1에 있어서, 상기 엘라스틴 유사 폴리펩타이드는 상기 목적 단백질의 C-말단에 결합된 것인, 목적 단백질의 정제 방법.

8

청구항 1에 있어서, 상기 융합 단백질은 상기 엘라스틴 유사 폴리펩타이드가 결합되지 않은 상기 목적 단백질의 말단에 His-tag를 포함하는 것인, 목적 단백질의 정제 방법.

9

청구항 1에 있어서, 상기 컬럼은 금속 이온이 고정된 레진이 내벽에 충전되어 있는 것인, 목적 단백질의 정제 방법.

10

청구항 1에 있어서, 상기 세척 완충액은 이미다졸을 포함하는 것인, 목적 단백질의 정제 방법.

11

청구항 1에 있어서, 상기 제3단계를 상기 세척 완충액의 이미다졸 농도를 높여 가면서 반복 수행하는, 목적 단백질의 정제 방법.

12

청구항 10 또는 11에 있어서, 상기 이미다졸은 10 내지 1,000 mM의 농도로 포함되는 것인, 목적 단백질의 정제 방법.