HSQC NMR을 이용한 대사물질 정량 분석 방법
Quantitative Analysis Method Of Metabolites Using HSQC NMR
특허 요약
본 발명은 대사물질의 정량 분석 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는, 내부 기준 물질 및 대사물질(metabolites)을 포함하는 표준 시료에 대해 NMR 분광기를 사용하여 2-차원의 1 H- 13 C HSQC 스펙트럼을 수득하여 대사물질의 농도 대 1 H- 13 C HSQC 피크 강도의 관계식을 수득하여 표준 곡선을 작성하여 상기 표준 곡선을 이용하여 피검 시료에 포함된 대사물질을 정량분석하는 것을 포함하는, 1 H- 13 C HSQC NMR을 이용한 대사물질 정량 분석 방법에 관한 것이다. 대사물질, 정량 분석, 표준 곡선, 핵자기공명 분광법, HSQC
청구항
번호청구항
1

하기를 포함하는, 1H-13C HSQC NMR을 이용한 대사물질 정량 분석 방법: 내부 기준 물질(internal standard) 및 대사물질(metabolites)을 포함하는 표준 시료를 준비하는 단계, 상기 표준 시료에 포함된 내부 기준 물질 및 대사물질에 대해 NMR (Nuclear Magnetic Resonance, 핵자기공명) 분광기를 사용하여 2-차원의 1H-13C HSQC 스펙트럼을 수득하는 단계, 상기 표준 시료에 포함된 대사물질의 농도에 대한 1H-13C HSQC 피크 강도를 나타내는 그래프를 작성하여 최소자승법 (least square method)으로 상기 대사물질에 대한 농도 대 1H-13C HSQC 피크 강도의 관계식을 수득하여 표준 곡선을 작성하는 단계, 대사물질을 포함하는 피검 시료에 대해 NMR 분광기를 사용하여 2-차원의 1H-13C HSQC 스펙트럼을 수득하는 단계, 및 상기 수득된 피검 시료의 1H-13C HSQC 스펙트럼의 피크 위치 및 피크 강도 값을 이용하여 상기 표준 곡선으로부터 상기 피검 시료에 포함된 대사물질의 종류 및 농도를 계산하는 단계: 여기에서, 상기 내부 기준 물질은 HEPES(4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid)이며, 상기 대사물질은 하기 4개 그룹의 각각을 포함하는 것임: 제 1 그룹: 4-아미노부티레이트, 아데노신, 알라닌, AMP, 아스라파진, 아스파르테이트, 베타인, 콜린, 시트레이트, 시트룰린, 크리에이틴, 에타놀아민, 과당, 글루타민산염, 산화된-글루타티온, 히스티딘, 호모세린, 이소루신, 유산염, 루신, 라이신, 말산염, 메티오닌, 미오-이노시톨, NAD, 페닌알라닌, 프롤린, 세린, 타르타레이트, 트랜스-4-히드록시프롤린, 트레할로스, 트립토판 및 발린 포함; 제 2 그룹: ADP, 아르기닌, 카나바닌, 카르니틴, 시스테인, 갈락토즈, 환원된-글루타티온, 글리신, 마노즈, 숙신산염, 자당, 타우린 및 트레오닌 포함; 제 3 그룹: 글리세롤, 글루타민, 글루코스, 푸트리신(1,4 디아미노부탄), 아세트산, 우리딘 및 베타인 포함; 제 4 그룹: MES, 오리니틴, 트레할로스 및 말토오스 포함.

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제 1 항에 있어서, 상기 표준 시료는 상기 대사물질들의 4개 그룹의 각각을 포함하는 4개의 시료로서 준비되며, 상기 4개의 표준 시료 각각에 대하여 NMR 분광기를 사용하여 2-차원의 1H-13C HSQC 스펙트럼을 수득하여 상기 4개의 표준 시료에 포함된 대사물질들 각각에 대하여 표준 곡선을 작성하는 것인, 1H-13C HSQC NMR을 이용한 대사물질 정량 분석 방법.

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제 1 항에 있어서, 상기 내부 기준 물질인 상기 HEPES의 1H-13C HSQC NMR 스펙트럼의 피크들 중 시료의 pH 및 농도 변화에 대하여 영향을 받지 않는 피크를 대사물질 각각의 농도 계산 시 내부 표준으로서 사용하는 것인, 1H-13C HSQC NMR을 이용한 대사물질 정량 분석 방법.

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제 1 항에 있어서, 상기 표준 시료로서 서로 다른 농도의 3개 이상의 표준 시료를 사용하는 것인, 1H-13C HSQC NMR을 이용한 대사물질 정량 분석 방법.

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제 1 항에 있어서, 상기 표준 시료 및 피검 시료가 중성 상태로 pH가 조절된 것인, 1H-13C HSQC NMR을 이용한 대사물질 정량 분석 방법.