숙주 제한인자 녹아웃 세포주 및 이의 용도
Host restriction factor knockout cell lines and uses thereof
특허 요약
본 발명은, 숙주 제한인자 녹아웃 세포주 및 이의 용도에 관한 것으로서, 본 발명은 포미바이러스 벡터를 제조하기 위한 세포주로서, 숙주 제한 인자 녹아웃 세포주를 제작하였으며, 293T 세포주 또는 293T 부유화세포주에서 TRIM28 및 STAT1이 고발현되는 것을 확인하여, 숙주 제한 인자로 TRIM28 및 STAT1을 선별하였다. 또한, 선별된 숙주 제한 인자를 CRISPR/Cas9을 이용하여 녹아웃 시키면, 포미바이러스 벡터의 복제가 증가하는 것을 확인하였다.
청구항
번호청구항
1

숙주 제한 인자(Host restriction factor)가 녹아웃(knockout)된 바이러스 벡터 생산용 세포주.

2

제 1항에 있어서,상기 숙주 제한 인자는, BST2/TETHERIN, TRIM28, IFP35, APOBEC3G, APOBEC3F, RelB, SGK1 및 STAT1으로 이루어진 군에서 선택된 것인, 세포주.

3

제 1항에 있어서,상기 녹아웃은 CRISPR/Cas9 시스템으로 수행되는 것인, 세포주.

4

제 3항에 있어서,상기 CRISPR/Cas9 시스템은, 서열번호 1을 포함하는 gRNA, 서열번호 4를 포함하는 gRNA, 서열번호 7을 포함하는 gRNA 및 서열번호 10을 포함하는 gRNA로 이루어진 군에서 선택된 gRNA로 수행되는 것인, 세포주.

5

제 3항에 있어서,상기 CRISPR/Cas9 시스템은 서열번호 2를 포함하는 crRNA, 서열번호 3을 포함하는 crRNA, 서열번호 5를 포함하는 crRNA, 서열번호 6을 포함하는 crRNA, 서열번호 8을 포함하는 crRNA, 서열번호 9를 포함하는 crRNA, 서열번호 11을 포함하는 crRNA 및 서열번호 12를 포함하는 crRNA로 이루어진 군에서 선택된 crRNA로 수행되는 것인, 세포주.

6

제 1항에 있어서,상기 바이러스는 포미바이러스(foamyvirus)인 것인, 세포주.

7

세포를 배양하는 단계;상기 배양된 세포에서 CRISPR/Cas9 시스템을 이용하여, 숙주 제한 인자(Host restriction factor)를 녹아웃 시키는 단계; 및 상기 숙주 제한 인자가 녹아웃된 세포를 선별하는 단계;를 포함하는, 바이러스 생산용 세포주의 제작 방법.

8

제 1항의 세포주를 배양하는 단계;상기 배양된 세포주에 바이러스 생산용 플라스미드를 형질감염(transfection) 시키는 단계; 및상기 배양된 세포로부터 바이러스를 수득하는 단계;상기 수득한 바이러스를 목적세포에 형질도입(Transduction)하고, 이를 평가하는 단계; 를 포함하는, 바이러스 벡터의 생산 방법.