세포내 침투능 및 표적 핵산 염기서열 특이적 가수분해능을 지닌 핵산 가수분해 항체, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 약학 조성물
Cell-penetrating, sequence-specific and nucleic acid-hydrolyzing antibody, method for preparing the same and pharmaceutical composition comprising the same
특허 요약
본 발명은 세포내 침투능 및 표적 핵산 염기서열 특이적 가수분해능을 지닌 핵산 가수분해 항체, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 약학 조성물에 관한 것으로, 상세하게는 세포 침투능을 가지면서 기질 특이성이 없는 핵산 가수분해 항체의 특정 부위를 변화시켜 핵산 가수분해 특성을 유지한 상태에서 서열 특이성을 갖도록 항체공학을 이용하여 개량함으로써, 특별한 외부 단백질 전달 시스템의 도움 없이 개량된 핵산 가수분해 항체가 스스로 세포내로 침투하여 세포질에 위치하거나 혹은 개량된 핵산 가수분해 항체를 세포 내부에서 발현시켰을 때 특정염기서열을 지닌 단일가닥/이중가닥의 표적 핵산에 특이적으로 결합하고 이를 가수분해하는 능력을 가져 특정 유전자의 발현을 감소시키는 것을 특징으로 한다.
청구항
번호청구항
16

제 1항의 핵산 가수분해 항체를 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 조성물.

17

삭제

1

세포내 침투능을 가지면서, 단일가닥 또는 이중가닥의 표적 핵산에 특이적으로 결합하고 이를 가수분해하는 능력을 지닌 핵산 가수분해 항체로서, 서열번호 21로 기재된 아미노산 서열을 갖는 핵산 가수분해 항체.

2

제 1항에 있어서, 상기 표적 핵산은 서열번호 13의 염기서열을 갖는 것을 특징으로 하는 핵산 가수분해 항체.

3

삭제

4

삭제

5

삭제

6

제 1항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 32의 염기서열을 갖는 DNA 유전자에 의해 코딩되는 것을 특징으로 하는, 핵산 가수분해 항체.

7

제 1항에 있어서, 상기 항체는 전체 IgG, 중쇄 가변영역의 단일 도메인, 경쇄 가변영역의 단일 도메인, 단일쇄 가변영역 단편 (scFv), (scFv)2, Fab, Fab'', F(ab'')2, diabody 및 dsFv로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 핵산 가수분해 항체.

8
  1. 세포 침투능을 가지면서 기질 특이성이 없는 핵산 가수분해 항체를 주형으로 하여 라이브러리를 제작하는 단계,2) 상기 1)단계에서 제작한 라이브러리 유전자를 표면 발현 벡터를 이용하여 세포 표면에 라이브러리를 제작하는 단계, 및3) 특정염기서열을 갖는 표적 핵산을 기질로 사용하여 이에 특이적으로 결합하는 돌연변이체를, 상기 2)단계에서 제작한 라이브러리로부터 선별하는 단계를 포함하는, 핵산 가수분해 항체의 제조방법.
9

제 8항에 있어서, 상기 1)단계에서 세포 침투능을 가지면서 기질 특이성이 없는 핵산 가수분해 항체는 전체 IgG, 중쇄 가변영역의 단일 도메인, 경쇄 가변영역의 단일 도메인, 단일쇄 가변영역 단편 (scFv), (scFv)2, Fab, Fab'', F(ab'')2, diabody 및 dsFv로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 핵산 가수분해 항체의 제조방법.

10

제 8항에 있어서, 상기 1)단계에서 세포 침투능을 가지면서 기질 특이성이 없는 핵산 가수분해 항체는 3D8 VL 4M 또는 이의 변이체인 것을 특징으로 하는, 핵산 가수분해 항체의 제조방법.

11

제 10항에 있어서, 상기 3D8 VL 4M은 3D8 VL의 DNA/RNA 인식부위인 c-(잔기 41-45), c''-(잔기 50-54), f-(잔기 90-94) 베타-가닥의 영역을 NNB 코돈 (N=A/T/C/G, B=C/G/T)을 이용하여 돌연변이시킨 것을 특징으로 하는, 핵산 가수분해 항체의 제조방법.

12

제 8항에 있어서, 상기 2)단계에서 표면 발현 벡터는 파지 디스플레이, 박테리아 디스플레이, 리보좀 디스플레이, RNA 디스플레이 및 효모 세포 표면 발현벡터로 이루어진 군으로부터 선택된 1종인 것을 특징으로 하는, 핵산 가수분해 항체의 제조방법.

13

제 8항에 있어서, 상기 3)단계에서 표적 핵산은 세포내 핵산 또는 외부 핵산인 것을 특징으로 하는, 핵산 가수분해 항체의 제조방법.

14

제 13항에 있어서, 상기 세포내 핵산은 암세포에 특이적으로 과발현되는 단백질을 코딩하는 핵산인 것을 특징으로 하는, 핵산 가수분해 항체의 제조방법.

15

제 13항에 있어서, 상기 외부 핵산은 바이러스 지놈 핵산 또는 바이러스 단백질을 코딩하는 핵산인 것을 특징으로 하는, 핵산 가수분해 항체의 제조방법.