PSEN2 N141I 돌연변이가 발생한 알츠하이머성 세포 모델 및 이의 제조방법
PSEN2 N141I mutant Alzheimer's cell model and the preparation method thereof
특허 요약
본 발명은 PSEN2 유전자에 N141I이 녹인된 알츠하이머 인간만능줄기세포 모델 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로 CRISPR/Cas9 시스템을 이용해 PSEN2 유전자에 N141I 돌연변이를 녹인시킨 알츠하이머성 인간유도만능줄기세포 모델, 이의 제조방법 및 상기 세포 모델을 이용한 알츠하이머 치료물질의 스크리닝 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따르면, 인간 유도만능줄기세포에 CRISPR/Cas9 유전자 편집기술을 이용해 PSEN2에 N141I 돌연변이를 녹인시켜 알츠하이머성 인간 유도만능줄기세포를 제작하였는바, 이는 기존 동물 모델에서 관찰되는 인간세포와 상이한 단백질의 발현패턴 등의 한계점들을 극복할 수 있다. 본 발명의 알츠하이머성 세포 모델은 PSEN2 기능 이상에 의한 알츠하이머 발병 기전, 치료물질 발굴 및 효능 검증 등에 유용하게 이용될 수 있을 것이다.
청구항
번호청구항
1

하기의 단계를 포함하는, PSEN2(Presenilin 2) 유전자에 N141I 돌연변이가 녹인(knock in)된 알츠하이머성 인간유도만능줄기세포 모델의 제조방법:(a) PSEN2를 표적하는 가이드 RNA(sgRNA) 및 Cas9 단백질 발현용 벡터를 제작하는 단계; 및(b) 인간유도만능줄기세포에 상기 벡터를 도입하고 배양하는 단계.

2

제 1항에 있어서, 상기 (b) 단계에서, 배양된 세포 중 벡터가 도입된 세포만을 분리하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 제조방법.

3

제 1항에 있어서,상기 (b) 단계 이후에 상기 배양된 세포를 분화시키는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 제조방법.

4

제 3항에 있어서, 상기 세포는 신경줄기세포 또는 뇌 오가노이드로 분화하는 것을 특징으로 하는, 제조방법.

5

제 1항에 있어서, 상기 가이드 RNA는 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 것을 특징으로 하는, 제조방법.

6

제 1항에 있어서, 상기 인간유도만능줄기세포는 건강한 인간의 B세포로부터 유래된 것을 특징으로 하는, 제조방법.

7

제 1항에 있어서, 상기 (b) 단계에서 배양은 1 내지 3일 동안 이루어진 것을 특징으로 하는, 제조방법.

8

제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조된, PSEN2(Presenilin 2)에 N141I 돌연변이가 녹인(knock in)된 알츠하이머성 인간유도만능줄기세포 모델.

9

하기의 단계를 포함하는, 알츠하이머 치료물질의 스크리닝 방법:(a) 제 8항의 알츠하이머성 인간유도만능줄기세포 모델에 후보물질을 처리하는 단계; 및(b) 후보물질이 처리된 인간유도만능줄기세포 모델을 무처리 대조군과 비교하여 줄기세포능(stemness) 회복 여부를 확인하는 단계.