효모 유래 액포 막 성분을 포함하는 소포체 및 이의 제조방법
Vesicles comprising Yeast-derived Vacuolar membrane and the method thereof
특허 요약
본 발명은 효모 유래 액포 막 성분을 이용하여 균질한 크기의 나노 소포체를 제조하는 방법에 관한 것으로, 본 발명에 따른 재조립 나노 소포체는 균질한 크기로 제작되어 세포 내 함입 및 전달이 용이하고, 재조립 이후에도 액포 막 성분이 갖는 면역조절인자를 그대로 유지함으로써 면역조절인자의 활성화, 이에 따른 면역 증강 효과를 나타낸다. 본 발명에 따른 나노 소포체는 균질한 크기로 제작되어 세포 내 함입 및 전달이 용이하고, 재조립 이후에도 액포막 성분이 갖는 면역조절인자를 그대로 유지함으로써 면역조절인자의 활성화, 이에 따른 면역 증강 효과를 나타낸다. 또한, 효모 유래 액포 막 성분으로만 구성되어 인체 친화적이고 제조된 소포체 내부에 물질을 탑재하는 데에도 활용될 수 있어 유용하다.
청구항
번호청구항
12

단백질, 핵산 및 합성 화합물로 구성된 군에서 선택되는 활성물질이 탑재된 효모 유래 액포 막 성분을 포함하는 재조립 소포체.

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a) 효모로부터 액포 막을 글라스비드를 이용하여 볼텍싱한 후 분리하는 단계;b) 상기 분리된 액포 막의 단백질 및 지질 성분을 균질화하여 막 재조립을 형성하는 단계; 및c) 상기 재조립된 액포 막을 압출하는 단계;를 포함하는 효모 유래 액포 막 성분을 포함하는 재조립 소포체를 제조하는 방법.

2

제 1항에 있어서, 상기 액포 막을 분리하는 단계는 a) 효모 세포를 파쇄한 후 원심분리하여 하층액을 분리하는 단계;b) 상기 하층액에 용해 용액과 글라스비드를 넣어 10 내지 20회 볼텍싱한 한 후, 얼음에 방치하는 단계; 및c) 상기 용액을 원심분리하여 상층액을 제거하고 하층액을 수거하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 효모 유래 액포 막 성분을 포함하는 재조립 소포체를 제조하는 방법.

3

제 1항에 있어서, 상기 액포 막의 균질화는 연마기(Grinder), 분쇄기(Mill), 균질화기(Homogenizer) 및 초음파 분쇄기(Sonicator)로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나로 균질화하는 것을 특징으로 하는, 효모 유래 액포 막 성분을 포함하는 재조립 소포체를 제조하는 방법.

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제 1항에 있어서, 상기 액포 막의 균질화는 분리된 액포 막을 재현탁시켜 2 내지 6℃에서 초음파 분쇄기로 50 내지 70분 동안 균질화하는 것을 특징으로 하는, 효모 유래 액포 막 성분을 포함하는 재조립 소포체를 제조하는 방법.

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제 1항에 있어서, 상기 액포 막을 압출하는 단계는 균질화된 액포 막 현탁액을 직경 50 내지 200nm의 공극을 갖는 막 필터에 20 내지 30회 반복하여 통과시키는 것을 특징으로 하는, 효모 유래 액포 막 성분을 포함하는 재조립 소포체를 제조하는 방법.

6

효모 유래 액포 막 성분을 포함하는 재조립 소포체.

7

제 6항에 있어서, 상기 재조립 소포체는 면역증강 활성을 갖는 것을 특징으로 하는, 효모 유래 액포 막 성분을 포함하는 재조립 소포체.

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효모 유래 액포 막 성분을 포함하는 재조립 소포체를 포함하는 면역증강용 조성물.

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제 8항에 있어서, 상기 면역증강용 조성물은 유도성 산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthase, iNOS) 또는 시클로옥시게나아제-2(cyclo oxygenase-2, COX2)의 발현을 증가시키는 것을 특징으로 하는, 면역증강용 조성물.

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제 8항에 있어서, 상기 면역증강용 조성물은 종양 괴사 인자-α(Tumor necrosis factor-α, TNF-α) 또는 인터루킨 6(Interleukin-6, IL-6)의 분비를 증가시키는 것을 특징으로 하는, 면역증강용 조성물.

11

a) 효모로부터 액포 막을 글라스비드를 이용하여 볼텍싱한 후 분리하는 단계;b) 상기 분리된 액포 막의 단백질 및 지질 성분을 균질화하고, 균질화된 액포 막 성분에 활성물질을 넣어 막 재조립을 형성하는 단계; 및c) 상기 재조립된 액포 막을 압출하는 단계;를 포함하는 단백질, 핵산 및 합성 화합물로 구성된 군에서 선택되는 활성물질이 탑재된 효모 유래 액포 막 성분을 포함하는 재조립 소포체를 제조하는 방법.