(a) 배양된 장 세포가 배치되고 유입되는 물질이 상기 장 세포를 통과하도록 형성되는 장 채널부, 및 배양된 간 세포가 배치되고 상기 장 세포를 통과한 물질 중 적어도 일부가 상기 간 세포와 접촉되도록 상기 장 채널부와 연결되는 간 채널부를 포함하는 생체 모사 마이크로 칩을 준비하는 단계; 및(b) 유리지방산(FFA(free fatty acid))이 상기 장 세포를 통과하여 상기 간 세포에 공급되어 인공 지방간이 형성되도록, 유리지방산을 상기 장 채널부에 유입시키는 단계를 포함하는, 인공 지방간 형성 방법.

제1항에 있어서,상기 (b) 단계는, 상기 장 채널부와 상기 간 채널부를 소정의 시간 동안 유리지방산이 포함된 용액으로 처리하는 것인, 인공 지방간 형성 방법.

제2항에 있어서,상기 유리지방산이 포함된 용액은, 인체에서 지방이 위를 지나 췌장리파제(pancreatic lipase)에 의해 분해되어 장으로 유입되는 흐름이 모사되도록, 올레인산(oleic acid)과 팔미트산(palmitic acid)을 혼합하여 제조되는 것인, 인공 지방간 형성 방법.

제3항에 있어서,상기 유리지방산이 포함된 용액은, 올레인산(oleic acid)과 팔미트산(palmitic acid)을 혼합한 다음 Sodium taurocholate를 첨가하고 쉐이킹(shaking)하여 마이셀(micelle)을 형성하는 것인, 인공 지방간 형성 방법.

제1항에 있어서,상기 (a) 단계와 상기 (b) 단계 사이에,(c) 상기 장 세포 및 상기 간 세포에 대해 starvation을 수행하는 단계를 포함하는, 인공 지방간 형성 방법.

제5항에 있어서,상기 (c) 단계는, 세포 주기가 동기화되고 세포 증식이 제한되도록 FBS를 포함하지 않고 BSA 및 P/S를 첨가한 DMEM으로 starvation을 수행하는 것인, 인공 지방간 형성 방법.

제1항에 있어서,상기 (a) 단계에서, 상기 생체 모사 마이크로 칩은 상기 간 채널부에서 간 세포가 위치하는 간 챔버와 연결되는 지방세포 챔버를 포함하도록 준비되고,상기 지방세포 챔버에는 배양된 지방세포가 구비되는 것인, 인공 지방간 형성 방법.

제7항에 있어서,상기 (a) 단계에서, 상기 간 세포의 시딩(seeding)은 상기 장 세포가 배양되고 나서 상기 간 세포가 포함된 용액이 상기 간 챔버로 공급되어 이루어지고, 상기 지방세포의 시딩은 상기 장 세포가 배양되고 나서 상기 지방세포가 포함된 용액이 상기 지방세포 챔버로 공급되어 이루어지는 것인, 인공 지방간 형성 방법.

(a) 제1항에 따른 인공 지방간 형성 방법에 의해 생체 모사 마이크로 칩에 인공 지방간을 형성하여, 인공 지방간이 형성된 지방간 칩을 제조하는 단계; 및(b) 상기 인공 지방간을 형성한 간 세포를 분석하는 단계를 포함하는, 지방간 분석 방법.

제9항에 있어서,상기 (a) 단계에서, 상기 생체 모사 마이크로 칩은,베이스 층;상기 베이스 층 상에 적층되고 상기 간 채널부가 형성되는 간 층;상기 간 층 상에 적층되고 상기 장 채널부가 형성되는 장 층; 및상기 장 층 상에 적층되고 상기 간 채널부와 연결되는 간 리저버 및 상기 장 채널부와 연결되는 장 리저버가 형성되는 리저버 층을 포함하되,상기 간 채널부는 간 세포가 배치되는 간 챔버를 포함하고,상기 장 채널부는 상기 간 챔버와 상측으로 연결되는 장 챔버를 포함하며,상기 장 세포는 상기 간 층과 상기 장 층 사이에 개재되는 멤브레인 상에 직접적으로 또는 간접적으로 안착되어 상기 장 챔버에 배치되는 것인, 지방간 분석 방법.

제10항에 있어서,상기 (a) 단계와 상기 (b) 단계 사이에,(c) 상기 간 세포를 고정하는 단계; 및(d) 상기 간 세포를 염색하는 단계를 포함하는, 지방간 분석 방법.

제11항에 있어서,상기 (c) 단계는,(c1) 상기 생체 모사 마이크로 칩에서 상기 리저버 층, 상기 장 층 및 상기 멤브레인을 분리하고, 리저버 홀이 형성된 리저버 유닛을 상기 리저버 홀이 상기 간 챔버와 상측으로 연결되도록 상기 간 층 상에 배치하는 단계; 및(c2) 상기 리저버 유닛을 통해 상기 간 챔버를 fixative 용액으로 처리하고 워싱(washing) 및 건조하는 단계를 포함하는 것인, 지방간 분석 방법.

제12항에 있어서,상기 (c2) 단계에서, 상기 fixative 용액은 포름알데하이드(Formaldehyde) 40 wt% 와 PBS가 wt% 기준 1:10 농도로 희석된 것인, 지방간 분석 방법.

제11항에 있어서,상기 (d) 단계는 Oil red O working solution으로 상기 간 세포를 염색하고, 상기 (b) 단계는 상기 간 채널부를 소정의 시간 동안 dye extraction solution으로 처리하여 상기 간 세포에 대해 소정의 파장으로 흡광도를 측정하는 것인, 지방간 분석 방법.

제1항에 따른 인공 지방간 형성 방법에 의해 생체 모사 마이크로 칩에 인공 지방간을 형성하여 제조되는 지방간 칩으로서,상기 생체 모사 마이크로 칩을 포함하되,상기 간 세포는 상기 장 세포를 통과하여 공급된 유리지방산에 의해 지방이 축적되는 것인, 지방간 칩.

제7항에 따른 인공 지방간 형성 방법에 의해 생체 모사 마이크로 칩에 인공 지방간을 형성하여 제조되는 지방간-지방세포 칩으로서,상기 생체 모사 마이크로 칩을 포함하되,상기 간 세포에는 상기 장 세포를 통과하여 공급된 유리지방산에 의해 지방이 축적되고,상기 생체 모사 마이크로 칩은 상기 간 채널부와 연결되는 지방세포 챔버를 더 포함하는 것인, 지방간-지방세포 칩.