마우스 렙틴 수용체 돌연변이 유전자형 판별방법
Genotyping method for the mouse leptin receptor mutation
특허 요약
동형접합체 불임을 나타내는 마우스 모델을 유지하는데 있어서 빠르고 효과적인 유전자형 확인이 매우 중요하다. 동형접합체 불임을 나타내는 렙틴 수용체 돌연변이 (C57BL/KsJ-db/db) 마우스는 비인슐린 의존적 당뇨병 동물모델로 일반적으로 이용되고 있다. 본 발명자들은 C57BL/KsJ-db/db 마우스의 빠르고 효과적인 유전자형 확인을 위해 테트라-프라이머 ARMS-PCR 방법을 이용하였다. 정상 (+/+) 마우스로부터 407bp 및 199bp PCR 산물이 증폭되었고; 반면, 동형접합체 (db/db) 마우스에서는 407bp 및 268bp PCR 산물이 증폭되었으며; 이형접합체 (db/+) 마우스에서는 497bp, 268bp 및 199bp PCR 산물이 증폭되었다. 뿐만 아니라, 테트라-프라이머 ARMS-PCR 분석법은 C57BL/6J 유전자 배경을 갖는 다른 마우스에서도 효과적이었다. 테트라-프라이머 ARMS-PCR 분석법은 1) C57BL/KsJ-db/db를 계통 유지하는데 유용하며, 2) 효율적으로 실험에 사용이 가능한 동형접합체(db/db)를 대량 생산에 유용하며, 3) 렙틴 수용체 돌연변이를 포함하는 이중 녹아웃 마우스를 고속 대량생산하는데 유용하다.
청구항
번호청구항
1

(가) 시험대상 마우스 유전체 DNA에 대하여Lepr-FO(Leptin receptor-forward outer primer); AGGGTTAGAGATCTTTCATCTTTAGCT, Lepr-FI(Leptin receptor-forward inner primer); TTAGAACATGTTTACATTTTGATGGAGGG, Lepr-RI(Leptin receptor-reverse inner primer); ATTTGTTTGGATTTGATACCAAACTTACTG 및Lepr-RO(Leptin receptor-reverse outer primer); AAATTTCAACTATAACTACCTGAGACGTA를 프라이머로 하여 테트라-프라이머 ARMS-PCR(amplification-refractory mutation system- polymerase chain reaction)을 수행하는 단계;(나) 얻어진 PCR 산물을 전기영동하는 단계; 및(다) 전기영동 결과 전개된 PCR 산물이 407bp 및 199bp인 경우 정상 (C57BL/KsJ-+/+) 마우스; 407bp 및 268bp인 경우 동형접합체 (C57BL/KsJ-db/db) 마우스; 497bp, 268bp 및 199bp인 경우 이형접합체 (C57BL/KsJ-db/+) 마우스로 결정하는 단계;를 포함하는 마우스 렙틴 수용체 돌연변이 유전자형 판별방법.

2

청구항 1에 있어서,마우스 유전체 DNA는 SDS와 프로티네이즈 K를 이용한 용균방법 및 페놀과 클로로포름을 이용한 추출방법으로 용균 및 추출함을 특징으로 하는 마우스 렙틴 수용체 돌연변이 유전자형 판별방법.

3

(가) DNA 중합효소; (나) dNTPs; (다) PCR용 완충용액; 및(라)Lepr-FO(Leptin receptor-forward outer primer); AGGGTTAGAGATCTTTCATCTTTAGCT, Lepr-FI(Leptin receptor-forward inner primer); TTAGAACATGTTTACATTTTGATGGAGGG, Lepr-RI(Leptin receptor-reverse inner primer); ATTTGTTTGGATTTGATACCAAACTTACTG 및Lepr-RO(Leptin receptor-reverse outer primer); AAATTTCAACTATAACTACCTGAGACGTA로 이루어진 프라이머 셋트;를 포함하는 마우스 렙틴 수용체 돌연변이 유전자형 판별용 PCR 킷트.

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