캐쳐스 전처리를 이용한 모발, 손톱 중 니코틴 대사물질 추출방법
Nicotine metabolites extraction from hair and nail using QuEChERS sample preparation
특허 요약
본 발명은 QuEChERS 전처리를 이용한 니코틴 대사물질 추출방법에 관한 것으로서, 생체시료인 모발 또는 손톱을 세척 및 건조하는 단계, 세척한 생체시료를 세절하는 단계, 세절한 생체시료를 강염기로 가수분해 하는 단계, 가수분해된 생체시료에 아세토니트릴과 QuEChERS를 적용하여 니코틴 대사물질을 추출하는 단계, 추출 후 dSPE (dispersive solid-phase extraction)를 적용하여 시료를 정제하는 단계 및 정제된 시료를 분석하는 단계를 포함한다. 상기와 같은 본 발명에 따르면, QuEChERS 전처리를 이용한 니코틴 대사물질 추출방법을 제공함으로써, 보편화된 소변검사가 힘든 영유아나 환자를 대상으로 비침습적으로 수집이 가능한 생채시료를 가지고 검출이 가능하다. 또한 검출대상자뿐만 아니라 분석 수행자가 노출되는 독성물질을 회피함으로써, 대상자와 수행자 모두 안전하게 검사할 수 있고, 기존의 QuEChERS 방법의 장점인 빠른 시간 내에 분석이 가능하다는 점이 접목되어, 안전하면서도 신속한 니코틴 대사물질 분석이 가능한 효과가 있다.
청구항
번호청구항
1

생체시료인 모발 또는 손톱을 세척 및 건조하는 단계;상기 세척한 생체시료를 세절하는 단계;상기 세절한 생체시료를 강염기로 가수분해 하는 단계;상기 가수 분해된 생체시료에 아세토니트릴과 캐처스(QuEChERS)를 적용하여 니코틴 대사물질을 추출하는 단계;상기 추출 후 dSPE (dispersive solid-phase extraction)를 적용하여 간섭물질이 제거된 시료를 정제하는 단계; 및상기 정제된 시료를 분석하는 단계;를 포함하고,상기 세척은 0.1% 황산도데실나트륨(sodium dodecyl sulfate, SDS) 수용액으로만 수행하고,상기 건조는 상온에서 수행하는 것을 특징으로 하는 캐처스 전처리를 이용한 니코틴 대사물질 추출방법.

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삭제

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제1항에 있어서,상기 강염기는 1 M 수산화나트륨(NaOH) 수용액이고, 상기 가수분해는 상기 1 M 수산화나트륨(NaOH) 수용액에 하룻 밤 동안 방치하는 것을 특징으로 하는 캐처스 전처리를 이용한 니코틴 대사물질 추출방법.

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제1항에 있어서,상기 캐처스(QuEChERS)는 original 캐처스, AOAC 캐처스 (association of analytical community), EN 캐처스 (european committee for standardization)로 이루어진 군에서 하나 이상을 포함하는 캐처스 전처리를 이용한 니코틴 대사물질 추출방법.

5

제4항에 있어서, 상기 original 캐처스는 황산마그네슘(magnesium sulfate, MgSO4), 염화나트륨(sodium chloride, NaCl)을 포함하고, 상기 AOAC 캐처스는 황산마그네슘(magnesium sulfate, MgSO4), 아세트산나트륨(sodium acetate, C2H3NaO2)을 포함하고, 상기 EN 캐처스는 황산마그네슘(magnesium sulfate, MgSO4) 염화나트륨(sodium chloride, NaCl), 소듐 시트레이트 트리베이직 디하이드레이트(sodium citrate tribasic dihydrate, 구연산), 소듐 시트레이트 디베이직 세스퀴하이드레이트 (sodium citrate dibasic sesquihydrate)을 포함하는 것을 특징으로 하는 캐처스 전처리를 이용한 니코틴 대사물질 추출방법.

6

제1항에 있어서,상기 니코틴 대사물질은 코티닌(cotinine, COT) 또는 트랜스-3-하이드록시코티닌(trans-3-hydroxycotinine, 3-HCOT)인 것을 특징으로 하는 QuEChERS 전처리를 이용한 니코틴 대사물질 추출방법.

7

제1항에 있어서,상기 dSPE (dispersive solid-phase extraction)는 C18 흡착제와 PSA (primary secondary amine) 흡착제로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 캐처스 전처리를 이용한 니코틴 대사물질 추출방법.

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제1항에 있어서,상기 정제는 2,800 g에서 원심분리하여 상징액을 25℃ 질소 기류 하에 건조하는 것을 특징으로 하는 캐처스 전처리를 이용한 니코틴 대사물질 추출방법.

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제1항에 있어서,상기 분석은 액체 크로마토그래프(liquid chromatograph, LC)를 통해 분리된 각 성분을 트리플 4 극 탠덤 질량분석기(triple quadrupole tandem mass spectrometry, MS/MS)를 사용하여 검출하는 것을 특징으로 하는 캐처스 전처리를 이용한 니코틴 대사물질 추출방법.