돼지 장내균총 비피도박테리움 써모필룸 유래 담즙염분해효소를 이용한 우르소데스옥시콜린산 합성방법
A method of synthesis of ursodesoxycholic acid(UDCA) using bile salt hydrolase(BSH) from Porcine intestinal flora Bifidobacterium thermophilum
특허 요약
본 발명은 돼지 장내균총인 비피도박테리움 써모필룸(Bifidobacterium thermophilum)에서 유래한 담즙염분해효소(bile salt hydrolase; BSH)를 이용하여 돼지 담즙산으로부터 우르소데스옥시콜린산(ursodesoxycholic acid; UDCA)을 합성하는 방법에 관한 것으로써, 본 발명자들은 돼지 장내균총인 Bifidobacterium thermophilum의 담즙염분해효소(bile salt hydrolase; BSH)를 사용한 UDCA 합성 방법이 반복적인 정제과정을 거치는 기존의 합성방법 보다 간편하고, 시간적인 이점과 함께 대량 생산 및 안정성 문제에 있어서 큰 이점이 있으며, 훨씬 경제적이면서 UDCA의 취득 수율을 높일 수 있다는 것을 확인하였다. 또한, 무엇보다도 폐기 부산물인 돼지 부산물을 활용하여 간 기능 개선, 간 개선을 통한 피로회복, 콜레스테롤 감소, 담성용해, 원발담즙성간경화증 등의 효과가 있는 고부가가치 UDCA를 제공한다는 점에서 경제적인 이점이 클 것으로 기대된다.
청구항
번호청구항
1

(a) 돼지 부산물로부터 돼지 담즙산을 추출하는 단계;(b) 상기 돼지 담즙산에 돼지 장내균총 비피도박테리움 써모필룸(Bifidobacterium thermophilum) 유래의 담즙염분해효소(bile salt hydrolase; BSH)를 발현하는 형질전환체로부터 분리한 담즙염분해효소를 첨가하여 캐노데옥시콜산(chenodeoxycholic acid; CDCA)을 추출하는 단계; 및(c) 상기 CDCA를 산화환원 반응시켜 우르소데스옥시콜린산(ursodesoxycholic acid; UDCA)를 합성하는 단계를 포함하는 UDCA의 합성방법.

2

제1항에 있어서,상기 돼지 부산물은 돼지의 간, 위, 소장, 및 대장으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 합성방법.

3

제1항에 있어서,상기 BSH는 형질전환(transformation)되어 있는 BL21 콜로니를 배양하여 얻어지는 것을 특징으로 하는, 합성방법.

4

제1항에 있어서,상기 (a) 단계는,상기 돼지 부산물에 에탄올을 첨가하는 단계;균질기(Homogenizer)를 이용하여 균질화하는 단계;필터 페이퍼를 이용하여 여과하는 단계;석유 에테르(petroleum ether)를 첨가하여 지방질을 제거하는 단계; 및메탄올을 첨가하여 돼지 담즙산을 추출하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 합성방법.

5

제1항에 있어서,상기 (b) 단계는,상기 돼지 담즙산에 상기 BSH를 첨가하여 가수분해시키는 단계;염화칼슘(CaCl2)를 첨가하여 CDCA 칼슘 염(CDCA calcium salt) 침전물을 형성시키는 단계;상기 CDCA 칼슘 염 침전물에 프로피온산(propionic acid)을 첨가하는 단계; 및물을 첨가하여 CDCA를 추출하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 합성방법.

6

제1항에 있어서,상기 (c) 단계는, CDCA에 N-브로모숙신이미드(N-bromosuccinimide)를 첨가하여 산화시키는 단계;나트륨 금속(sodium metal)를 첨가하여 환원시키는 단계;디메틸포름아미드(dimethylformamide; DMF)와 비스(트리메틸실릴)아민(bis(trimethylsilyl)amine; HMDS)을 첨가하는 단계; 및염산(HCl)을 첨가하여 UDCA를 합성하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 합성방법.

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