야로이아 속 효모에서의 세포 표면 단백질을 이용한목적단백질의 세포 표면 발현방법
A METHOD FOR SURFACE DISPLAY OF TARGET PROTEINS USINGCELL SURFACE PROTEINS OF THE YEAST YARROWIA
특허 요약
본 발명은 산업 효모인 야로이아 속 세포 표면에 목적단백질을 발현하기 위한 플라스미드 및 이를 이용한 목적단백질의 세포 표면 발현방법에 관한 것이다. 본 발명의 플라스미드는 세포질 내에 독립적으로 또는 크로모좀 내에 삽입되어 존재하며, 목적단백질을 야로이아 속 유래의 세포 표면 단백질과 융합하여 발현한다. 특히, 크로모좀에 삽입되어 존재하는 경우, 상응하는 크로모좀 상의 내인성 세포 표면 단백질을 코딩하는 유전자를 파쇄하여 목적단백질을 야로이아 리폴리티카 세포 표면에 보다 안정적으로 발현할 수 있다. 본 발명의 세포 표면 발현 시스템은 활성 단백질을 야로이아 속 세포 표면에 직접 발현함으로써 소수성 기질을 이용할 수 있는 야로이아 속의 효모를 세포촉매제로 직접 사용할 수 있는 유용성을 가진다. 야로이아 속 효모, 세포 표면 발현, 야로이아 리폴리티카, 세포벽 단백질.
청구항
번호청구항
1

각각 서열번호 19, 21, 22, 23, 24, 25 및 26으로 표시되는 YlAGA1, YlCRH1, YlCRH2, YlCWP1, YlYWP1, YlPIR3, 및 YlSED1로 구성되는 군으로부터 선택되는 세포 표면 단백질 코딩 유전자; 목적단백질 코딩 유전자; 및 이들 상부에 작동가능하게 연결된 프로모터를 포함하며, 상기 목적단백질 코딩 유전자는 세포내 발현시 세포 표면 단백질과 융합되어 야로이아 속 효모의 세포 표면에 발현되는 것을 특징으로 하는, 세포 표면 발현용 플라스미드.

2

각각 서열번호 19, 21, 22, 23, 24, 25 및 26으로 표시되는 YlAGA1, YlCRH1, YlCRH2, YlCWP1, YlYWP1, YlPIR3, 및 YlSED1로 구성되는 군으로부터 선택되는 세포 표면 단백질 코딩 유전자; 목적단백질 코딩 유전자; 이들 상부에 작동가능하게 연결된 프로모터; 및 숙주세포 크로모좀으로의 삽입을 유도하는, 각각 서열번호 27 및 28로 표시되는 CWP1 I1 및 CWP1 I2, 또는 각각 서열번호 29 및 30으로 표시되는 YWP1 I1 및 YWP1 I2의 한 쌍의 염기서열을 포함하며, 상기 목적단백질 코딩 유전자는 세포내 발현 시 세포 표면 단백질과 융합되어 야로이아 속 효모의 세포 표면에 발현되는 것을 특징으로 하는, 세포 표면 발현용 플라스미드.

3

삭제

4

제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 프로모터는 XPR2(extracellular alkaline protease), TEF1(translation elongation factor), POX2(Acyl Coenzyme A Oxidase) 및 POT1(peroxisomal 3-oxoacyl-CoA-thiolase)으로 이루어진 군으로 선택되는 유전자의 프로모터인 것을 특징으로 하는, 플라스미드.

5

삭제

6

제 1 항에 있어서, 도 1에 표시된 개열지도를 갖는 pIA-FAga1p, pIA-FCrh1p, pIA-FCrh2p, pIA-FCwp1p, pIA-FYwp1p, pIA-Fpir3p 또는 pIA-FSed1p 인 것을 특징으로 하는, 플라스미드.

7

제 2 항에 있어서, 도 4에 표시된 개열지도를 갖는 pBS-CY-FCw1 또는 pRS-YY-FYw1 인 것을 특징으로 하는, 플라스미드.

8

제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 야로이아 속의 효모는 야로이아 리포폴리티카 (Yarrowia lipolytica)인 것을 특징으로 하는, 플라스미드.

9

제 1 항 또는 제 2 항의 플라스미드를 포함하는 것을 특징으로 하는, 야로이아 속의 효모.

10

제 9 항에 있어서, 야로이아 속의 효모는 야로이아 리포폴리티카인 것을 특징으로 하는 효모.

11

(a) 제 1 항의 플라스미드 또는 제 2 항의 플라스미드를 야로이아 속 효모에 형질전환 하는 단계; (b) 단계 (a)의 형질전환된 효모를 배양하여 목적단백질을 숙주세포의 표면에 발현하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 목적단백질을 야로이아 속 효모의 세포 표면에 발현하는 방법.

12

제 11 항에 있어서, 야로이아 속 효모는 야로이아 리포폴리티카인 것을 특징으로 하는, 목적단백질을 야로이아 속 효모의 세포 표면에 발현하는 방법.

13

제 11 항 또는 제 12 항에 있어서, 단계 (a)는 크로모좀 상의 YlCWP1 및 YlYWP1 유전자 모두를 파쇄할 수 있는, 제 2 항의 플라스미드로 형질전환하는 것을 특징으로 하는, 목적단백질을 야로이아 속 효모의 세포 표면에 발현하는 방법.