그람 양성 세균의 세포외소낭을 검출 및 정량하는 방법
Method for detecting and quantifying extracellular vesicles of Gram-positive bacteria
특허 요약
본 발명은 그람 양성 세균의 세포외소낭을 검출 및 정량하는 방법을 제공한다. 본 발명은 그람 양성 세균의 세포외소낭을 검출할 수 있고, 흡광도를 측정하여 세포외소낭의 농도를 간이 정량할 수 있다. 또한, 그람 양성과 그람 음성 세균 유래 세포외소낭(엑소좀) 구별이 가능하다.
청구항
번호청구항
1

균주에서 세포외소낭을 추출하는 1단계;염기성 용액을 혼합하고 반응하는 2단계;산성 용액을 혼합하고 반응하는 3단계;구리 화합물 촉매와 뮤라믹산을 검출하는 시약을 혼합하고 반응하는 4단계; 및550~600 nm에서 흡광도를 측정하는 5단계를 포함하는, 그람 양성 세균의 세포외소낭을 검출 및 정량하는 방법.

2

제1항에 있어서, 상기 2단계는 수산화나트륨 (NaOH), 탄산나트륨 (Na2CO3), 나트륨알콕사이드 (Sodium alkoxide), 수산화칼륨(KOH), 탄산칼륨 (K2CO3) 및 칼륨알콕사이드 (Potassium alkoxide)로 이루어진 군에서 선택되는 염기성 용액을 혼합하고 30~45 ℃에서 15분 내지 1시간 동안 반응하는 것인, 그람 양성 세균의 세포외소낭을 검출 및 정량하는 방법.

3

제1항에 있어서, 상기 3단계는 황산, 염산 및 질산으로 이루어진 군에서 선택되는 산성 용액을 혼합하고 90~130 ℃에서 3 내지 10분 동안 반응하는 것인, 그람 양성 세균의 세포외소낭을 검출 및 정량하는 방법.

4

제1항에 있어서, 상기 4단계의 구리 화합물 촉매는 아세트산구리, 염화구리, 황산구리, 수산화구리, 질산구리 및 시안화구리로 이루어진 군에서 선택되는 것인, 그람 양성 세균의 세포외소낭을 검출 및 정량하는 방법.

5

제1항에 있어서, 상기 4단계의 뮤라믹산을 검출하는 시약은 하이드록시디페닐, 페닐렌디아민, 암모니아, 인디고카민, 페난트롤린, 페놀프탈레인, 브로모크레졸 그린, 페닐 에티닐 싸이클로헥산 및 페놀설폰프탈레인으로 이루어진 군에서 선택되는 것인, 그람 양성 세균의 세포외소낭을 검출 및 정량하는 방법.

6

제1항에 있어서, 상기 4단계는 30~45 ℃에서 10 내지 30분 동안 반응하는 것인, 그람 양성 세균의 세포외소낭을 검출 및 정량하는 방법.

7

제1항에 있어서, 상기 세균은 그람 양성 세균으로, 웨이셀라(Weissella) 또는 락토바실러스 (Lactobacillus) 속의 균주인 것인, 그람 양성 세균의 세포외소낭을 검출 및 정량하는 방법.

8

제7항에 있어서, 상기 그람 양성 세균은 웨이셀라 콘푸사(Weissella confusa), 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) 및 락토바실러스 아시도필루스(Lactobacillus acidophilus)로 이루어진 군에서 선택되는 것인, 그람 양성 세균의 세포외소낭을 검출 및 정량하는 방법.

9

제1항에 있어서, 상기 550nm600nm에서 흡광도 값이 0.20.9이면 그람 양성 세균으로 판별하는 것인, 그람 양성 세균의 세포외소낭을 검출 및 정량하는 방법.