평면화 구강점막 오가노이드 제조방법
Method for preparing sheeted oral mucosa organoids
특허 요약
본 발명은 평면화 구강점막 오가노이드 제조방법, 상기 제조방법으로 제조된 평면화 구강점막 오가노이드, 상기 평면화 구강점막 오가노이드를 포함하는 세포 시트제 및 상기 평면화 구강점막 오가노이드를 유효성분으로 포함하는, 구강점막 질환 예방 또는 치료용 의약외품 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 제조방법으로 제조된 평면화 구강점막 오가노이드는 세포 시트제로서 구강병변 부위에 생착하여 구강점막 질환을 예방 또는 치료하는데 유용하게 사용될 수 있다.
청구항
번호청구항
1

다음의 단계를 포함하는, 평면화 구강점막 오가노이드 제조방법:(a) 세포외기질에 포매되어 있는 구강점막 상피세포를 배양하여 구강점막 오가노이드를 함유한 배양물을 수득하는 단계;(b) 상기 배양물에서 세포외기질을 제거하는 단계;(c) 상기 세포외기질이 제거된 배양물에 효소를 첨가하고 물리적 압력을 가하여 단일세포를 수득하는 단계;(d) 상기 단일세포를 함유한 배양물을 원심분리하여 얻은 단일세포펠렛을 배지에 현탁하여 현탁액을 수득하는 단계;(e) 상기 현탁액을 배양 용기에 시딩(seeding)하는 단계; 및(f) 상기 배양 용기에 성장인자를 포함한 배지를 첨가한 후 배양하여 평면화 구강점막 오가노이드를 수득하는 단계.

2

제1항에 있어서,상기 구강점막 상피세포는 구강점막 조직에 디스파제(dispase) 효소를 처리하여 상피층판을 분리하고, 이로부터 세포를 추출하여 얻어지는 것인, 제조방법.

3

제1항에 있어서, 상기 (a)단계의 배양은 EGF, Y27632 및 A8301을 포함하는 배지에서 배양되는 것인, 제조방법.

4

제1항에 있어서,상기 (b)단계에서 상기 배양물에 콜라게나제(collagenase)를 처리하여 세포외기질을 제거하는, 제조방법.

5

제4항에 있어서,상기 콜라게나제를 처리한 후 10분 내지 30분간 37℃에서 인큐베이션하는 단계를 더 포함하는, 제조방법.

6

제1항에 있어서, 상기 (e) 단계의 현탁액 내 세포가 1 x 104 개 내지 1 x 108 개인, 제조방법.

7

제1항에 있어서,상기 성장인자는 EGF 및 Y27632 중 선택되는 하나 이상인, 제조방법.

8

제1항에 있어서,상기 효소는 트리플(Tryple), 트립신(Trypsin), EDTA 또는 아큐테이즈(Accutase)인, 제조방법.

9

제1항에 있어서,상기 (f)단계의 배양은 5일 내지 15일간 수행하는 것인, 제조방법.

10

제1항에 있어서,상기 (f)단계의 배양은 35℃ 내지 45℃에서 수행되는 것인, 제조방법.

11

제10항에 있어서,상기 (f)단계의 배양 이후 20℃ 내지 30℃에서 배양하는 단계를 더 포함하는, 제조방법.

12

제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 제조방법으로 제조된, 평면화 구강점막 오가노이드.

13

제12항의 평면화 구강점막 오가노이드를 포함하는 세포 시트제.

14

제12항의 평면화 구강점막 오가노이드를 유효성분으로 포함하는, 구강점막 질환 예방 또는 치료용 의약외품 조성물.

15

제14항에 있어서,상기 구강점막 질환은 구내염, 아프타성 구내염, 편평태선, 약물에 의한 접촉성 병소, 천포창 및 점막 유천포창으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상인, 의약외품 조성물.