CRISPR/Cas9 매개 폴리시스트론성 종양유전자 발현 벡터 및 이를 이용한 동물 종양 모델
CRISPR/Cas9-mediated polystronic oncogene expression vector and animal tumor model using same
특허 요약
본 발명은 CRISPR/Cas9 매개 폴리시스트론성 종양유전자 발현 벡터 및 이를 이용한 동물 종양 모델에 관한 것으로, 본 발명의 종양 돼지 모델은 임상적으로 효용가치가 떨어지는 설치류 모델에 대한 새로운 대체 모델로 종양에 대한 기초 및 전임상연구의 활용에 유용하게 사용될 수 있다.
청구항
번호청구항
6

제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유전자는 2A 펩타이드 서열로 연결된 것을 특징으로 하는, 종양 동물 모델 제작용 재조합 발현 벡터.

7

제1항에 있어서, 상기 벡터는 CMV-Cas9#1-EGFP-pA-Cas9#2-DsRed-P2A-SV40LT-T2A-HRASG12V인 것을 특징으로 하는, 종양 동물 모델 제작용 재조합 발현 벡터.

1

종양성 유전자 (oncogene)인 SV40 large T (SV40LT);서열번호 1 및 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 가이드 RNA (gRNA)를 암호화하는 유전자;Cas9 단백질을 암호화하는 유전자; 및상기 유전자에 작동가능하게 연결된 프로모터; 를 포함하는 것을 특징으로 하는, 종양 동물 모델 제작용 재조합 발현 벡터.

2

제1항에 있어서, 상기 종양성 유전자는, HRASG12V 를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 종양 동물 모델 제작용 재조합 발현 벡터.

3

제1항에 있어서, 상기 프로모터는 CMV 프로모터인 것을 특징으로 하는, 종양 동물 모델 제작용 재조합 발현 벡터.

4

제1항에 있어서, 상기 재조합 벡터는 형광 단백질을 코딩하는 유전자를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 종양 동물 모델 제작용 재조합 발현 벡터.

5

제4항에 있어서, 상기 형광 단백질은 EGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein), DsRed 또는 이들 모두를 포함하는 것을 특징으로 하는, 종양 동물 모델 제작용 재조합 발현 벡터.

8

제1항에 있어서, 상기 재조합 발현 벡터는 Cas9 유전자와 표적 gRNA를 도입을 통해 암세포화 및 종양 발달을 선택적으로 유도하는 것을 특징으로 하는, 종양 동물 모델 제작용 재조합 발현 벡터.

9

제1항의 재조합 발현 벡터가 도입된 것을 특징으로 하는, 종양 동물모델 제작용 형질전환 세포주.

10

제1항의 재조합 발현 벡터로 형질전환된 체세포의 핵을, 탈핵된 난자에 이식하여 형성한 핵 이식란.

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제1항의 재조합 벡터가 도입된 핵 공여 세포의 핵을 탈핵된 난자에 이식하여 난자를 생산하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 인간을 제외한 종양 동물 모델의 제작 방법.

12

제11항의 방법으로 제작된 것을 특징으로 하는, 인간을 제외한 종양 동물 모델.

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제12항에 있어서, 상기 동물은 돼지인 것을 특징으로 하는, 종양 동물 모델.

14
  1. 제12항의 종양 동물 모델에 항암제 후보물질을 투여하는 단계; 및2) 상기 후보물질을 투여한 동물모델을 후보물질을 투여하지 않은 대조군과 비교하여 후보물질에 의해 종양형성이 개선되거나 치료되는 경우 이를 항암제로 판단하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항암제의 스크리닝 방법.