퇴행성 신경질환 치료제 스크리닝용 아밀로이드 베타 올리고머-금 나노입자 복합체 제조방법
Method for preparing amyloid beta oligomer-gold nanoparticle complex for drug screening of neurodegenerative diseases
특허 요약
본 발명은 약물에 의한 아밀로이드 분해 효능을 용이하게 검지할 수 있는 퇴행성 신경질환 치료제 스크리닝용 비색 센서 키트 및 퇴행성 신경질환 치료제 스크리닝 방법에 관한 것이다.
청구항
번호청구항
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제8항의 아밀로이드 베타 올리고머-금 나노입자 복합체를 포함하는 퇴행성 신경질환 치료제 스크리닝용 비색 센서.

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하기 단계를 포함하는 퇴행성 신경질환 치료제 스크리닝용 아밀로이드 베타 올리고머-금 나노입자 복합체(Amyloid beta oligomer-shelled gold nanoparticle: ASGN) 제조방법:(가) 하기 단계를 포함하는 금 나노입자 제조 단계; (ㄱ) 염화 금산(HAuCl4) 전구체와 시트르산 나트륨을 반응시켜 시트르산으로 안정화된 금 나노입자 제조 단계; 및(ㄴ) 상기 금 나노입자를 원심분리 및 세척하여 금 나노입자를 획득하는 단계.(나) 하기 단계를 포함하는 아밀로이드 베타(Aß) 정제 단계;(1) 동결 건조된 Aß 펩티드를 1,1,1,3,3,3-헥사플루오로-2-프로판올(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol: HFIP)에 용해하는 단계; 및(2) 상기 (1) 단계의 용액에서 수분과 HFIP를 증발시키는 단계.(다) 상기 (가) 단계에서 제조된 금 나노입자와 상기 (나) 단계에서 정제한 Aß를 1:12001600 몰비율로 혼합하여 교반하는 단계;(라) 상기 (다) 단계의 혼합물을 3539 ℃에서 20~28시간 동안 인큐베이션하여 ASGN를 제조하는 단계.

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제1항에 있어서, 상기 (ㄱ) 단계는 HAuCl4 2.55 ml을 증류수 10ml에 녹인 염화 금산 용액과 증류수에 시트르산 나트륨 108.8 mg을 녹인 용액 10ml를 혼합하고 교반하며 가열하고, 용액이 끓기 시작하면 시트르산 나트륨 용액 0.9ml를 첨가하고 15분 동안 가열하여 시트르산으로 안정화된 금 나노입자는 제조하는 것인, 제조방법.

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제1항에 있어서, 상기 (ㄴ) 단계는 시트르산으로 안정화된 금 나노입자를 8,00012,000 rpm에서 36분 동안 세척하여 18~22 nm 직경의 금 나노입자를 획득하는 것인, 제조방법.

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제1항에 있어서, 상기 (1) 단계는 동결 건조된 Aß 펩티드 1 mg을 2300㎕ HFIP에 용해한 후 상온에서 40~80 분 동안 유지하는 것인, 제조방법.

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제1항에 있어서, 상기 (2) 단계는 상기 (1) 단계의 용액을 튜브에 분주하고 2시간 동안 진공 동결건조하고 영하의 온도 조건 및 진공 조건에서 13001700 rpm으로 4080 분 동안 원심분리하여 수분과 HFIP를 증발시키는 것인, 제조방법.

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제1항에 있어서, 상기 (다) 단계는 금 나노입자와 Aß를 1:1400 몰비율로 혼합하여 교반하는 것인, 제조방법.

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제1항에 있어서, 상기 (라) 단계는 (다) 단계의 혼합물을 37 ℃에서 24시간 동안 인큐베이션하여 ASGN을 제조하는 것인, 제조방법.

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제1항 내지 7항 중 어느 한 항의 방법으로 제조된 퇴행성 신경질환 치료제 스크리닝용 아밀로이드 베타 올리고머-금 나노입자 복합체(Amyloid beta oligomer-shelled gold nanoparticle: ASGN)로서, 상기 복합체는 금 나노입자 표면에 아밀로이드 베타 올리고머가 hard corona 패턴으로 코팅된 것을 특징으로 하며,상기 ASGN의 직경은 25~32 nm인 것을 특징으로 하는, 아밀로이드 베타 올리고머-금 나노입자 복합체.