인공결합쌍을 이용한 단백질 검출 방법 및 검출용 키트
Protein detecting method and kit using synthetic binding pair
특허 요약
본 발명은 호스트-게스트 화학의 상호작용을 기반으로 한 게스트 화합물이 결합된 표적 단백질을 검출하는 방법 및 검출 키트에 관한 것으로서, 호스트 화합물-퍼옥시다아제의 복합체, 과산화수소 및 발광 전구체를 포함하는 발광성 조성물을 처리함으로써 간편하면서도 강한 상호작용을 바탕으로 한 고감도의 인공결합쌍을 이용한 단백질 검출 방법 및 단백질 검출용 키트를 제공한다.
청구항
번호청구항
9

제 1항에 있어서,상기 발광 전구체는 산화에 의해 화학발광하는 것인 인공결합쌍을 이용한 단백질 검출 방법.

10

제 1항에 있어서,상기 호스트 화합물과 게스트 화합물 사이의 결합 친화도(Ka)는 1010 M-1 이상인 인공결합쌍을 이용한 단백질 검출 방법.

11

게스트 화합물을 포함하는 반응성 리간드, 호스트 화합물이 결합된 퍼옥시다아제(peroxydase), 과산화수소 및 발광 전구체를 포함하는 단백질 검출용 키트.

12

제 11항에 있어서,상기 반응성 리간드를 포함하는 게스트 화합물은 아민기, 카르복실기, 아자이드기, 티올기, 보론산기, 알데히드기 및 술폰산기로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나의 반응성 리간드가 결합된 C5 내지 C20의 지환족 화합물, 메탈로센 화합물 또는 그 유도체인 단백질 검출용 키트.

1

인공결합쌍을 이용한 단백질 검출 방법으로서, a) 표적 단백질을 포함하는 분석 시료를 준비하는 단계; b) 상기 분석 시료를 반응성 리간드를 포함하는 게스트 화합물로 처리하여 게스트 화합물이 결합된 표적 단백질을 제조하는 단계; c) 상기 처리된 분석 시료를 호스트 화합물이 결합된 퍼옥시다아제(peroxydase), 과산화수소 및 발광 전구체를 포함하는 발광성 조성물로 처리하는 단계; 및 d) 상기 분석 시료에서 발광 여부를 판별하는 단계; 를 포함하는 인공결합쌍을 이용한 단백질 검출 방법.

2

제 1항에 있어서,상기 반응성 리간드를 포함하는 게스트 화합물은 C5 내지 C20의 지환기 또는 메탈로센을 포함하는 인공결합쌍을 이용한 단백질 검출 방법.

3

제 1항에 있어서,상기 반응성 리간드를 포함하는 게스트 화합물은 아다만탄, 페로센 또는 그 유도체를 포함하는 인공결합쌍을 이용한 단백질 검출 방법.

4

제 1항에 있어서,상기 반응성 리간드는 아민기, 카르복실기, 아자이드기, 티올기, 보론산기, 알데히드기 및 술폰산기로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나인 인공결합쌍을 이용한 단백질 검출 방법.

5

제 1항에 있어서,상기 반응성 리간드는 효소에 의해 공유결합될 수 있는 펩타이드를 포함하는 인공결합쌍을 포함한 단백질 검출 방법.

6

제 1항에 있어서,상기 호스트 화합물은 하기 화학식 1을 만족하는 것인 인공결합쌍을 포함한 단백질 검출 방법.[화학식 1](상기 화학식 1에서,X는 O, S 또는 NH이며,A1 및 A2는 각각 독립적으로 H, OR, SR, NHR, COOH, O(CH2)aR 또는 O(CH2)aSR이며, 상기 a는 1 내지 5의 정수이고, 상기 R은 H, 할로겐, C1-C30알킬, C2-C30알케닐, C2-C30알키닐, C2-C30카르보닐알킬, C3-C30시클로알킬, C2-C30헤테로시클로알킬, C6-C30아릴, C6-C30아릴C1-C30알킬, C2-C30헤테로아릴 또는 C2-C30 헤테로아릴C1-C30알킬이며; n은 4 내지 14의 정수이다.)

7

제 6항에 있어서, 상기 화학식 1에서 n은 7이고, X는 산소, A1 및 A2는 각각 독립적으로 H, OR, O(CH2)aR 또는 O(CH2)aSR이며, 상기 a는 1 내지 5의 정수이고, 상기 R은 H, C1-C30알킬 또는 C-2-C30알케닐인 인공결합쌍을 이용한 단백질 검출 방법.

8

제 1항에 있어서,상기 b) 단계 이후 분석 시료의 단백질을 분자량 별로 전개하는 단계를 더 포함하는 인공결합쌍을 이용한 단백질 검출 방법.

13

제 11항에 있어서,상기 호스트 화합물이 결합된 퍼옥시다아제(peroxydase)는 하기 화학식 1로 표시되는 화합물이 공유결합된 HRP(Horseradish peroxydase)인 단백질 검출용 키트. [화학식 1](상기 화학식 1에서,X는 O, S 또는 NH이며,A1 및 A2는 각각 독립적으로 H, OR, SR, NHR, COOH, O(CH2)aR 또는 O(CH2)aSR이며, 상기 a는 1 내지 5의 정수이고, 상기 R은 H, 할로겐, C1-C30알킬, C2-C30알케닐, C2-C30알키닐, C2-C30카르보닐알킬, C3-C30시클로알킬, C2-C30헤테로시클로알킬, C6-C30아릴, C6-C30아릴C1-C30알킬, C2-C30헤테로아릴 또는 C2-C30 헤테로아릴C1-C30알킬이며; n은 4 내지 14의 정수이다.)