마이크로 RNA 기반 헤어핀 RNA
micro RNA-based short hairpin RNA
특허 요약
본 발명은 마이크로 RNA 기반 헤어핀 RNA에 관한 것으로, 종양 선택적인 Pol II 프로모터를 통해 발현하는 microRNA 기반의 shRNA(mshRNA)를 종양 선택적 살상 아데노바이러스에 적용하여 치료 유전자의 과발현에 의한 독성 문제를 해결하고 바이러스를 이용한 유전자 치료의 효율성 증대에 기여할 수 있다.
청구항
번호청구항
1

프로모터, 상기 프로모터에 작동가능하게 연결된 표적 유전자에 특이적인 shRNA(short hairpin RNA)를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열 및 종결 신호 서열이 순차적으로 연결되고, 상기 shRNA는 스템 구조의 5'- 및 3'-오버행에 miRNA 골격을 포함하는 mshRNA이며, 하기의 조건을 만족하는 shRNA 발현 카세트:(i) Pol II 프로모터; (ii) 상기 프로모터와 mshRNA 구조 간의 거리는 1 내지 100 nt; 및(iii) mshRNA의 루프 및 스템의 길이는 각각 15 내지 30 nt

2

제1항에 있어서,상기 프로모터와 mshRNA 구조 간의 거리는 40 내지 70 nt인, shRNA 발현 카세트.

3

제1항에 있어서,mshRNA의 루프 및 스템의 길이는 각각 18 내지 25 nt인, shRNA 발현 카세트.

4

제1항에 있어서,miRNA는 miR-129-5p, miR-27a-3p, miR-92b-3p, miR-200a, miR-148, miR-370, miR-409-5p, miR-127-5p, miR-496, miR-633, miR-874, miR-132-3p, miR-128, miR-136-5p, miR-138-5p, miR-145, miR-124-3p, miR-129-5p, miR-487, miR-370, miR-34a, miR-125b, miR-146a, miR-29a, miR-27a-3p, miR-24, miR-16, miR-141, miR-151, miR-181a/c, miR-191, miR-194, miR-195, miR-204, miR-205, miR-214, miR-221, miR-338, miR-30, miR-31, miR-21, miR-125, miR-155, miR-206, miR-125, miR-7, miR-10b 및 miR-331-3P로 이루어진 군에서 선택된 것인, shRNA 발현 카세트.

5

제1항에 있어서,Pol II 프로모터는 서바이빈 프로모터, CMV 프로모터, SOX2(3) 프로모터, AFP 프로모터, CEA 프로모터, 알부민 프로모터, E2F 프로모터, Fos 프로모터, RSV 프로모터, HSV 프로코터, SV40 프로모터, EF1a 프로모터, TERT 프로모터 및 PSA 프로모터로 이루어진 군에서 선택된 것인, shRNA 발현 카세트.

6

제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 shRNA 발현 카세트를 포함하는 유전자 전달 시스템.

7

제6항에 있어서,유전자 전달 시스템은 내이키드 (naked) 재조합 DNA 분자, (ⅱ) 플라스미드, (ⅲ) 바이러스 벡터 및 (ⅳ) 상기 내이키드 재조합 DNA 분자 또는 플라스미드를 내포하는 리포좀 또는 니오좀의 형태인, 유전자 전달 시스템.

8

제7항에 있어서,바이러스 벡터는 재조합 아데노바이러스, 아데노-관련 바이러스 (Adeno-associated viruses: AAV), 레트로바이러스, 렌티바이러스, 헤르페스 심플렉스 바이러스, 백시니아 바이러스, 리오바이러스, 폭스바이러스, 셈리키 포리스터 바이러스 및 미즐즈 바이러스 (Measles virus)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인, 유전자 전달 시스템.

9

제7항에 있어서, 상기 유전자 전달 시스템은 재조합 아데노바이러스인, 유전자 전달 시스템.

10

제9항에 있어서, 상기 재조합 아데노바이러스는 복제불능 아데노바이러스 또는 종양 살상 아데노바이러스인, 유전자 전달 시스템.

11

제6항의 유전자 전달 시스템으로 형질도입된 숙주 세포.

12

제6항의 유전자 전달 시스템을 포함하는 표적 유전자 억제용 조성물.

13

c-Met에 특이적인 shRNA를 발현하는 제1항의 shRNA 발현 카세트를 함유하는 재조합 종양 선택적 살상 아데노바이러스를 포함하는 EGFR(epidermal growth factor receptor)-티로신 키나아제 억제제(TKIs)에 대한 약제 내성 억제 또는 개선용 의약 조성물.

14

제13항에 있어서,의약 조성물은 엘로티닙, 라파티닙, 아파티닙, 네라티닙, 포지오티닙, 라파티닙 및 제피티닙으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 EGFR 티로신 키나아제 억제제를 더 포함하는, EGFR-티로신 키나아제 억제제(TKIs)에 대한 약제 내성 억제 또는 개선용 의약 조성물.