종양 특이적 발현이 개선된 유전자전달체
Gene Delivery Systems Exhibiting Enhanced Tumor-Specific Expression
특허 요약
본 발명은 (a) 다음을 포함하는 유전자발현 조절서열: (ⅰ) HRE(hypoxia-responsive element: HRE) 인핸서 서열; 및 (ⅱ) 상기 HRE 서열의 다운스트림에 위치한 hTERT(human telomere reverse transcriptase) 프로모터; 그리고, (b) 상기 유전자발현 조절서열에 작동적으로 연결된(operatively linked) 유전자 서열을 포함하는 종양 특이적 발현이 개선된 유전자전달체, 특히 재조합 아데노바이러스에 관한 것이다. 또한, 상기 재조합 아데노바이러스를 포함하는 약제학적 항종양 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 재조합 아데노바이러스는 선택적 종양세포 살상능 또는 고사능이 개선된 효과를 발휘하며, 특히 저산조 조건에서 크게 향상된 항종양 효과를 나타낸다. 또한, 암세포 내에서 재조합 아데노바이러스의 특이적 발현으로 체내에서의 안정성이 증대되어 더욱 개선된 항종양 효과를 유도할 수 있다. 유전자전달체, 아데노바이러스, HRE, hTERT, TRAIL, 저산소, 종양세포, 암, 유전자치료
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다음을 포함하는 암세포 특이적 살사능이 개선된 재조합 아데노바이러스: (a) 아데노바이러스의 ITR(inverted terminal repeat) 서열; (b) 다음을 포함하는 유전자발현 조절서열: (ⅰ) HRE(hypoxia-responsive element: HRE) 인핸서 서열; 및 (ⅱ) 상기 HRE 서열의 다운스트림에 위치한 hTERT(human telomere reverse transcriptase) 프로모터; 그리고, (c) 상기 유전자발현 조절서열에 작동적으로 연결된(operatively linked) 유전자 서열.

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제 6 항에 있어서, 상기 HRE 서열은 서열목록 제1서열의 뉴클레오타이드 서열이 2-10번 반복된 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.

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제 6 항에 있어서, 상기 hTERT 프로모터는 변형 hTERT 프로모터이며, 상기 변형 hTERT 프로모터는 서열목록 제4서열에 기재된 천연형(natural-occurring) hTERT 프로모터에 추가적인 c-Myc 결합위치, Sp1 결합위치 또는 c-Myc 결합위치와 Sp1 결합위치를 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.

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제 6 항에 있어서, 상기 hTERT 프로모터는 변형 hTERT 프로모터이며, 상기 변형 hTERT 프로모터는 서열목록 제4서열의 천연형 hTERT 프로모터에 (i) 서열목록 제5서열의 뉴클레오타이드 서열, (ⅱ) 서열목록 제6서열의 뉴클레오타이드 서열 또는 (ⅲ) 상기 ⅰ)과 ⅱ)의 뉴클레오타이드 서열이 추가적으로 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.

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제 6 항에 있어서, 상기 hTERT 프로모터는 변형 hTERT 프로모터이며, 상기 변형 hTERT 프로모터는 서열목록 제7서열 또는 제8서열에 기재된 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.

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제 10 항에 있어서, 상기 변형 hTERT 프로모터는 서열목록 제8서열에 기재된 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.

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제 6 항에 있어서, 상기 유전자발현 조절서열은 E1A 유전자의 업스트림에 위치해 있는 것을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.

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제 6 항에 있어서, 상기 재조합 아데노바이러스는 E3 유전자 영역이 결실된 것이고, 상기 유전자발현 조절서열은 결실된 E3 유전자 영역에 위치해 있는 것을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.

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제 6 항에 있어서, 상기 재조합 아데노바이러스는 비활성화된 E1B 19 유전자, E1B 55 유전자 또는 E1B 19/E1B 55 유전자를 갖는 것을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.

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제 6 항에 있어서, 상기 재조합 아데노바이러스는 활성의 E1A 유전자를 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.

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제 15 항에 있어서, 상기 유전자발현 조절서열은 활성의 E1A 유전자의 업스트림에 위치해 있으며, E1A 유전자의 발현은 상기 유전자발현 조절서열에 의해 조절되는 것을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.

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제 15 항에 있어서, 상기 재조합 아데노바이러스는 ElA 유전자 서열에 위치한 Rb 결합 부위를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열 중에서 45번째 Glu 잔기가 Gly으로 치환된 변이 및 121-127번째 아미노산 서열이 전체적으로 Gly으로 치환된 변이를 갖는 것을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.

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제 6 항에 있어서, 상기 재조합 아데노바이러스는 종양 억제인자 유전자, 항원성 유전자, 세포독성 유전자, 세포증식 억제 유전자, 세포사멸 유전자 및 항-신생 혈관 생성 유전자로 구성된 군으로부터 선택되는 치료학적 트랜스 유전자를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.

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제 18 항에 있어서, 상기 치료학적 트랜스 유전자는 TRAIL(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand)-코딩 뉴클레오타이드 서열인 것을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.

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제 18 항에 있어서, 상기 재조합 아데노바이러스는 E3 유전자 영역이 결실된 것이고, 상기 치료학적 트랜스 유전자는 결실된 E3 유전자 영역에 위치해 있는 것을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.

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(a) 상기 제 6 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항의 재조합 아데노바이러스의 치료학적 유효량; 및 (b) 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 항종양 조성물.