칸나비디올을 처리한 성상세포 조건배지, 이의 제조방법 및 이를 이용한 신경세포 배양방법
ASTROCYTE-CONDITIONED MEDIUM FROM CANNABIDIOL-TREATED ASTROCYTE, PREPARING METHODS THEREOF AND METHODS OF CULTURING NEURONAL CELLS USING THE SAME
특허 요약
본 발명은 칸나비디올이 처리된 성상세포의 조건배지, 이의 제조방법 및 이를 이용한 신경세포의 배양방법에 관한 것으로서, 신경세포-성상세포 공동배양 플랫폼을 통해 칸나비디올의 신경 독성 효과를 저감시키고, 신경세포의 발달 촉진 효과를 현저히 향상시키는 효과를 제공하며, 나아가 신경퇴행성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로의 활용을 목적으로 한다.
청구항
번호청구항
1

(S10) 하나 이상의 스페이서(spacers)가 부착된 제1플레이트에 성상세포를 시딩(seeding)하고 배양하는 단계;(S20) 제2플레이트에 신경세포를 시딩하고 배양하는 단계;(S30) 상기 제1플레이트 및 제2플레이트를 평행하고, 마주보는 방향으로 이격되도록 배치하고, 상기 스페이서를 통해 제1플레이트 및 제2플레이트 사이를 비접촉 환경으로 조성하여 신경세포-성상세포 샌드위치 공배양 플랫폼을 형성하는 단계; 및(S40) 상기 공배양 플랫폼에 칸나비디올(cannabidiol)을 처리하는 단계;를 포함하는 성상세포의 조건배지 제조방법.

2

제 1항에 있어서,상기 스페이서의 높이는 0.01 내지 1 ㎜인, 성상세포의 조건배지 제조방법.

3

제 1항에 있어서,상기 칸나비디올의 농도는 10 μM 이상인, 성상세포의 조건배지 제조방법.

4

제 1항에 있어서, 상기 (S30) 단계 이전, 제1플레이트의 배지를 신경세포의 배지로 교체하는 단계;를 더 포함하는, 성상세포의 조건배지 제조방법.

5

제 1항에 있어서, 상기 (S40) 단계는 신경세포의 칸나비디올 수용체의 길항제를 처리하는 단계;를 더 포함하는 성상세포의 조건배지 제조방법.

6

제 5항에 있어서, 상기 길항제는 GW9662, 캡사제핀 (capsazepine, CPZ), ZM241385, 및 (S)-WAY 100135 dihydrochloride (WAY) 또는 이들의 유도체에서 선택되는 적어도 하나를 포함하는, 성상세포의 조건배지 제조방법.

7

제 1항에 있어서, (S50) 칸나비디올이 처리된 제1플레이트의 배지(conditioned medium)를 수거 및 여과하는 단계;를 더 포함하는 성상세포의 조건배지 제조방법.

8

제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항의 제조방법에 의하여 제조된 성상세포의 조건배지.

9

제 8항에 따른 성상세포의 조건배지를 포함하는 신경세포 배양용 조성물.

10

하나 이상의 스페이서(spacers)가 부착된 제1플레이트에 성상세포를 시딩(seeding)하고 배양하는 단계;제2플레이트에 신경세포를 시딩하고 배양하는 단계;상기 제1플레이트 및 제2플레이트를 평행하고, 마주보는 방향으로 이격되도록 배치하고, 상기 스페이서를 통해 제1플레이트 및 제2플레이트 사이를 비접촉 환경으로 조성하여 신경세포-성상세포 샌드위치 공배양 플랫폼을 형성하는 단계;상기 공배양 플랫폼에 칸나비디올(cannabidiol)을 처리하는 단계;칸나비디올이 처리된 공배양 플랫폼의 제1플레이트의 배지(conditioned medium)를 수거 및 여과하여 성상세포의 조건배지를 수득하는 단계; 및상기 성상세포의 조건배지를 신경세포에 처리하는 단계;를 포함하는 신경세포 배양방법.

11

제 10항에 있어서,상기 칸나비디올을 처리하는 단계는 신경세포의 칸나비디올 수용체의 길항제를 처리하는 단계를 포함하는, 신경세포 배양방법.

12

제 8항에 따른 성상세포의 조건배지를 유효성분으로 포함하는, 신경퇴행성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.

13

제 12항에 있어서,상기 신경퇴행성 질환은 알츠하이머 증후군, 파킨슨 증후군, 헌팅턴 증후군, 루게릭병, 외상후 스트레스 장애, 다발성 경화증, 대뇌 허혈질환 및 근위축성측색경화증으로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나 이상인 것인, 신경퇴행성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.