신경 세포 지지용 배지 조성물의 제조방법
Preparation method of medium composition for neurosupportiveness
특허 요약
본 발명은 신경 세포 지지용 배지 조성물의 제조방법 및 이를 통해 제조한 신경세포 지지용 배지 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 뇌 조직 세포외기질 유래의 하이드로겔에서 배양된 별아교세포를 이용한 신경세포지지를 위한 별아교세포 조정배지를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 신경 세포 지지용 배지 조성물은 종래의 배양 방법을 이용한 별아교세포의 배양 시 세포 지지 효과 대비 현저히 향상된 세포 지지 효과를 나타냄으로써, 부가가치가 높은 신경 세포 재생 의약(regenerative medicine) 또는 조직 공학 분야에서 널리 활용할 수 있으며, 실제 생체 내에서의 별아교세포와 신경 세포 간의 상호 작용을 규명함으로써, 의학계의 난제로 여겨지는 다양한 문제의 해결에 도움을 줄 수 있을 것이다.
청구항
번호청구항
1

조직을 탈세포화하여 탈세포화 세포외 기질(decellularized extracellular matrix; dECM)을 추출하는 단계; 및상기 탈세포화 세포외 기질에 별아교세포(astrocyte)를 혼합하여 겔화한 후, 3차원 배양하는 단계;를 포함하는, 신경세포지지용 배지 조성물의 제조방법.

2

제 1항에 있어서,상기 조직은 뇌 조직(brain tissue)인, 신경세포지지용 배지 조성물의 제조방법.

3

제 1항에 있어서,상기 별아교세포는 라투스 노르베기쿠스(Rattus norvegicus)의 대뇌 피질로부터 수득한 1차 별아교세포를 배양하여 얻는 것인, 신경세포지지용 배지 조성물의 제조방법.

4

제 1항에 있어서,상기 3차원 배양은 3 x 104 내지 7 x 104 세포/mL의 밀도로 배양하는 것인, 신경세포지지용 배지 조성물의 제조방법.

5

제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항의 제조방법으로 제조된, 신경세포지지용 배지 조성물.

6

제 5항에 있어서,상기 조성물에 포함된 하이드로겔 섬유는 40~60 nm의 직경을 갖는 것인, 신경세포지지용 배지 조성물.

7

제 6항에 있어서,상기 조성물에 포함된 별아교세포는 3차원 배양시 최장 최단 평균 엔드피트(endfeet) 사이의 거리가 40 내지 45 μm인, 신경세포지지용 배지 조성물.

8

a) 제 5항 내지 제7항 중 어느 한 항의 신경세포 지지용 배지 조성물에서 전체 RNA를 추출하는 단계;b) 추출한 전체 RNA의 발현 수준 변화를 측정하는 단계; 및c) 발현 수준 변화에 따라 관련 RNA를 그룹화하는 단계;를 포함하는, 생체 내(in vivo)-유사 별아교세포 배양에 적합한 배지 조성물의 판별 방법.

9

제 8항에 있어서,상기 측정은 유전자 발현 변화의 군집 분석(clustering analysis) 및 GO(gene ontology) 분석을 통해 이루어지는 것인, 생체 내(in vivo)-유사 별아교세포 배양에 적합한 배지 조성물의 판별 방법.

10

제 8항에 있어서,상기 그룹화를 통해 별아교세포 경로 및 세포 외 환경에 대한 반응과 같은 외부 자극에 관련된 유전자의 발현은 증가하고, 세포 골격 및 증식과 관련된 유전자의 발현은 감소하는 것인, 생체 내(in vivo)-유사 별아교세포 배양에 적합한 배지 조성물의 판별 방법.