아가로스 젤을 이용한 항체의 교차 반응 제거를 통한 다중 형광 신호 증폭 방법
METHOD OF FLUORESCENT SIGNAL AMPLIFICATION VIA SIMPLE REMOVE OF CROSS-REACTION USING NHS-ACTIVATED AGAROSE GEL
특허 요약
다양한 실시예들은 아가로스 젤을 이용한 항체의 교차 반응 제거를 통한 다중 형광 신호 증폭 방법을 제공할 수 있다. 다양한 실시예들에 따르면, 다중 형광 신호는 아가로스 젤을 이용하여, 상이한 타입들의 표적 단백질들의 각각에 대한 교차 반응이 제거된 상이한 항체들을 준비하고, 표적 단백질들의 각각에 결합된 상이한 1차 항체들에, 상이한 항체들의 조합에 따른 상이한 항체 쌍들을 각각 결합하여, 형광 신호들을 형성하는 것에 의해, 증폭되어 제조될 수 있다.
청구항
번호청구항
1

상이한 타입들의 표적 단백질들의 각각에 대해 증폭된 다수의 형광 신호들로 이루어지는 다중 형광 신호 증폭 방법에 있어서, 각각에 대한 교차 반응이 제거된 상이한 항체들을 준비하는 단계; 및상기 표적 단백질들의 각각에 결합된 상이한 1차 항체들에, 상기 상이한 항체들의 조합에 따라 서로로부터 구분되는 상이한 항체 쌍들을 각각 결합하여, 상기 형광 신호들을 형성하는 단계를 포함하고, 상기 상이한 항체들을 준비하는 단계는, 아가로스 젤을 이용하여, 상기 상이한 항체들의 각각에 대해, 상기 상이한 항체들과 상기 교차 반응을 일으키는 다수의 직교적인 항체들과의 상기 교차 반응을 제거하는 단계를 포함하는,방법.

2

제1 항에 있어서,상기 상이한 항체들은,형광 분자들로 각각 표지되어 있는,방법.

3

제1 항에 있어서,상기 교차 반응을 제거하는 단계는,상기 상이한 항체들의 각각을 정제하면서, 상기 교차 반응을 제거하는 단계인,방법.

4

제1 항에 있어서, 상기 교차 반응을 제거하는 단계는,정제하고자 하는 항체들 및 상기 정제하고자 하는 항체들과 각각 교차 반응을 일으키는 상이한 직교적인 항체들을 준비하는 단계; 상기 아가로스 젤에 상기 상이한 직교적인 항체들을 모두 투입하는 단계 - 상기 상이한 직교적인 항체들이 상기 아가로스 젤에 연결됨 -;상기 아가로스 젤에 상기 정제하고자 하는 항체들을 투입하는 단계 - 상기 투입된 항체들 중 일부가 상기 상이한 직교적인 항체들에 교차 반응을 통해 결합됨 -; 및상기 투입된 항체들 중 나머지를 상기 상이한 항체들 중 하나로 획득하는 단계를 포함하는,방법.

5

제4 항에 있어서, 상기 정제하고자 하는 항체들은,형광 분자들로 표지되어 있는,방법.

6

제4 항에 있어서,상기 상이한 직교적인 항체들은,상기 정제하고자 하는 항체들과 각각 교차 반응을 일으키는 모든 직교적인 항체들을 포함하는,방법.

7

제4 항에 있어서,상기 아가로스 젤에 상기 상이한 직교적인 항체들을 모두 투입하는 단계에서, 상기 아가로스 젤의 표면의 NHS기와 상기 상이한 직교적인 항체들의 표면의 아민기가 반응하여, 아마이드 결합이 형성됨에 따라, 상기 상이한 직교적인 항체들이 상기 아가로스 젤에 연결되는,방법.

8

제7 항에 있어서,상기 아가로스 젤에 상기 정제하고자 하는 항체들을 투입하는 단계는,상기 아가로스 젤의 표면에서 잔여의 NHS기를 제거한 후에, 상기 아가로스 젤에 상기 정제하고자 하는 항체들을 투입하는 단계인, 방법.

9

제1 항에 있어서,상기 상이한 항체 쌍들의 각각은, 상기 상이한 항체들 중 두 개로부터 각각 결정되는 적어도 하나의 제1의 2차 항체 및 적어도 하나의 제2의 2차 항체로 이루어지는, 방법.

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제1 항에 있어서, 상기 형광 신호들을 형성하는 단계는, 상기 상이한 1차 항체들의 각각에, 상기 상이한 항체 쌍들을 다수의 계층들로 결합하는 단계를 포함하는, 방법.

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제9 항에 있어서,상기 형광 신호들을 형성하는 단계는, 상기 표적 단백질들의 각각에 상기 상이한 1차 항체들을 개별적으로 결합하는 단계;상기 상이한 1차 항체들의 각각에, 상기 상이한 항체들 중 일부로부터 각각 결정되는 상이한 제1의 2차 항체들을 개별적으로 결합하는 단계; 및상기 상이한 제1의 2차 항체들의 각각에, 상기 상이한 항체들 중 나머지로부터 각각 결정되는 상이한 제2의 2차 항체들을 개별적으로 결합하는 단계를 포함하는, 방법.

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제11 항에 있어서, 상기 형광 신호들을 형성하는 단계는, 상기 상이한 제2의 2차 항체들의 각각에 상기 상이한 제1의 2차 항체들을 개별적으로 추가하여 결합하는 단계를 더 포함하는, 방법.

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제12 항에 있어서, 상기 상이한 제2의 2차 항체들을 개별적으로 결합하는 단계, 또는 상기 상이한 제1의 2차 항체들을 개별적으로 추가하여 결합하는 단계 중 적어도 하나는, 반복적으로 수행되는, 방법.

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제2 항에 있어서, 상기 상이한 1차 항체들, 상기 상이한 항체 쌍들 또는 상기 형광 분자들은,결합되는 표적 단백질의 타입에 따라, 조합되는,방법.

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제9 항에 있어서, 상기 제1의 2차 항체의 타겟은 상기 제2의 2차 항체의 호스트와 동일하고,상기 제1의 2차 항체들의 호스트는 상기 제2의 2차 항체의 타겟과 동일한, 방법.

16

제6 항에 있어서, 호스트와 타겟이 쥐(rat)와 생쥐(mouse) 및 그 반대인 항체들,호스트와 타겟이 닭(chicken)과 염소(goat) 및 그 반대인 항체들, 및호스트와 타겟이 토끼(rabbit)와 당나귀(donkey) 및 그 반대인 항체들은 서로와 교차 반응을 일으키는, 방법.

17

제1 항 내지 제16 항 중 어느 한 항의 방법에 따라 증폭된 다중 형광 신호를 통해 이미지를 처리하는 이미지 처리 장치.