배경: 엑소좀 매개 세포외 분비를 통한 miRNA의 분비는 많은 암에서 관찰되며, RAB27A는 엑소좀 분비를 조절하는 강력한 인자이다. 전이성 신세포암(RCC)에서 본 연구는 RAB27A 조절에 의해 특정 miRNA가 분비되는 과정을 통해 암 전이의 기전이 어떻게 작동하는지 살펴보고자 하였다. 방법: RAB27A의 knockdown(KD) 및 과발현(overexpressing, OE) RCC 세포를 사용하여 세포 이동과 부착을 평가하였다. RAB27A OE 세포의 엑소좀 입자 수와 크기는 Exoview를 이용해 분석하였고, 내강내 소포(intraluminal vesicles, ILV) 및 다중소포체(multivesicular bodies, MVB)의 경우 전자현미경을 통해 측정하였다. RNA 서열 분석, 단백질-단백질 상호작용 네트워크, 경쟁적 내인성 RNA(ceRNA) 네트워크 분석을 통해 엑소좀으로 cargo-sorting되어 이후 분비될 가능성이 높은 대표적 하향 조절 miRNA를 확인하였다. 접합자 표지(molecular beacon)인 miR-137-3p(폴드 변화 339로 가장 대표적으로 하향 조절된 유전자 중 하나)를 제작하였고, 그 분비를 Exoview를 이용해 분석하였다. 또한 RAB27A OE 및 대조 세포를 엑소좀을 포함하는 배지에 배양하여, 암세포의 전이에 영향을 미치는 종양억제 miRNA의 유입(uptake)을 확인하였다. 결과: 이동과 세포 부착은 RAB27A OE 세포에서 RAB27A KD 세포보다 더 높았다. 전자현미경 결과, 세포당 다중소포체와 내강내 소포의 수는 대조 세포에 비해 RAB27A OE 세포에서 더 높았으며, 이는 이들이 분비됨을 시사한다. miR-127-3p가 엑소좀으로 정렬(sorting)되어 세포외로 제거됨이 확인되었다. 단백질-단백질 상호작용 분석에서는 MYCN이 RAB27A-OE RCC 세포에서 가장 중요한 허브(hub)로 나타났다. ceRNA 네트워크 분석에서는 MAPK4가 miR-127-3p와 강하게 상호작용하는 것으로 확인되었다. 결론: RAB27A 과발현 세포에서 엑소좀 분비를 통해 miR-127-3p를 제거하는 과정은, MYCN을 활성화함으로써 MAPK 경로를 억제하지 않고 전이성 잠재력을 획득하게 할 수 있다. miRNA를 포함하는 엑소좀은 암 치료를 위한 유용한 치료 표적이다.

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