본 연구에서는 표적 RNA에 하이브리드화된 두 개의 인접한 절단 프로브에서 무결찰(ligation-free) DNA 신장 방법을 규명하여, 무결찰 핵산 증폭 반응 개발을 위한 기반을 제시한다. 이 반응에서 DNA 신장은 표적 RNA가 존재하는 경우 결찰과 무관하게 순방향 프로브에서 phosphorothioated-hairpin 프로브로 진행한다. 이어지는 두 번째 DNA 신장은 phosphorothioated 프로브의 니크(nick) 부위와 self-priming 영역에서 동시에 일어난다. 따라서 clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)/CRISPR-associated protein(Cas) 12a의 결합 부위가 반복적으로 증폭되어, CRISPR-Cas12a 존재 하에서 형광 신호를 유도한다. 이러한 무결찰 등온 유전자 증폭 방법은 표적 RNA를 49.2 fM의 감도로 검출할 수 있다. 또한 두 가지 유형의 mRNA 검출이 가능하여, 본 방법이 암 동반진단(cancer companion diagnostics)에 적용될 잠재력을 보여준다. 특히, 제안된 방법은 사람 세포에서 추출한 mRNA 및 종양 보유 마우스 조직과 요(urine) 시료의 mRNA 검출에도 적용 시 효능을 나타낸다. 따라서 새로 개발된 무결찰 등온 핵산 증폭 시스템은 다양한 유전자 검출 플랫폼에서 광범위하게 활용될 것으로 기대된다.

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