1차년도 (2021년)
• 대장암 세포주에서 PHF20 과발현시 ATP 생성, 미토콘드리아 의존성 및 PKB 신호전달에 미치는 영향 규명/ PHF20-TG 마우스 모델에서도 검증
• siRNA를 이용한 PHF20의 Knockdown시 세포 성장에 미치는 영향 확인 (cell migration), 미토콘드리아 기능에 미치는 영향 확인 (ATP, pH 변화)
• PHF20에 의한 암세포 대사의 변화 분석 (stable isotope 이용한 glucose 사용)
2차년도 (2022년)
• PHF20 과발현에 의한 OPA1, Fis1의 발현 변화 검증 및 미토콘드리아 형태 및 기능 분석
• 대장암 세포주에서 PHF20 과발현 혹은 knockdown 세포주 구축/PHF20-TG 마우스 모델도 사용
• Proteomics를 이용하여 구축된 세포주를 이용하여 증가 혹은 감소되어있는 핵심단백질/핵심 대사산물 선별
3차년도 (2023년)
• 대장암 세포주에서 PHF20과 OxPhos Complex의 물리적 상호 작용 분석
• 각 구성 단백질의 deleltion mutant 제작 및 GST-full down assay 를 통한 비교 분석
• 선별된 핵심단백질과 PHF20의 상호 작용 분석 /PHF20-TG 마우스 모델에서도 검증
• 대장암 환자의 암조직에서 면역화학염색을 통해 선별된 OxPhos Complex 발현에 확인
•TEM 분석을 통하여 대장암 환자의 암조직에서 미토콘드리아의 형태 분석
•대장암 환자의 암조직에서 선별된 핵심단백질의 증감에 대한 임상적 의미 상호 분석
1차년도 (2021년)
• 대장암 세포주에서 PHF20 과발현시 ATP 생성, 미토콘드리아 의존성 및 PKB 신호전달에 미치는 영향 규명/ PHF20-TG 마우스 모델에서도 검증
• siRNA를 이용한 PHF20의 Knockdown시 세포 성장에 미치는 영향 확인 (cell migration), 미토콘드리아 기능에 미치는 영향 확인 (ATP, pH 변화)
• PHF20에 의한 암세포 대사의 변화 분석 (stable isotope 이용한 glucose 사용)
2차년도 (2022년)
• PHF20 과발현에 의한 OPA1, Fis1의 발현 변화 검증 및 미토콘드리아 형태 및 기능 분석
• 대장암 세포주에서 PHF20 과발현 혹은 knockdown 세포주 구축/PHF20-TG 마우스 모델도 사용
• Proteomics를 이용하여 구축된 세포주를 이용하여 증가 혹은 감소되어있는 핵심단백질/핵심 대사산물 선별
3차년도 (2023년)
• 대장암 세포주에서 PHF20과 OxPhos Complex의 물리적 상호 작용 분석
• 각 구성 단백질의 deleltion mutant 제작 및 GST-full down assay 를 통한 비교 분석
• 선별된 핵심단백질과 PHF20의 상호 작용 분석 /PHF20-TG 마우스 모델에서도 검증
• 대장암 환자의 암조직에서 면역화학염색을 통해 선별된 OxPhos Complex 발현에 확인
•TEM 분석을 통하여 대장암 환자의 암조직에서 미토콘드리아의 형태 분석
•대장암 환자의 암조직에서 선별된 핵심단백질의 증감에 대한 임상적 의미 상호 분석
본 과제는 당뇨병성 신장병 모델에서 insulin/Grem1의 분자적 조절기전을 연구하기 위해 한국/충남대학교 박종선 교수 연구실과 영국/퀸스대학교 Belfast의 Derek Brazil 교수 연구실간 국제 공동연구 네트워크를 구축함.
연구 목표는 교환 방문, 공동연구 미팅, 최신 연구방법 교환, 연구인력 교류(포스닥/대학원생), 국제 공동연구 계획서 작성 및 지원 방안 확보임. 핵심 연구 내용은 1~3개월 Derek Brazil 교수 방문, 3~12개월 연구방법론 및 인력 교류, 9~12개월 박종선 교수 방문, 10~12개월 계획서 작성임. 기대 효과는 Grem1과 인슐린 신호 연계 연구의 융합 촉진, 공동과제 지속 가능성 확보, Grem1 관련 연구인력 양성 및 학생 교환 정보 확산임.
？ 1차년도 _x000D_
-지방세포에서 adeno virus와 과발현 백터를 이용한 PHF20 과발현 시스템 구축 _x000D_
-siRNA나 바이러스를 이용한 Knock down 시스템 구축_x000D_
-과발현 시스템에서 지방합성 관련 유전자 스크리닝을 통한 핵심 단백질 선별_x000D_
？ 2차년도_x000D_
-선별된 핵심 지방산 합성 단백질과 PHF20과의 작용 기전 연구_x000D_
-과발현, KD시스템에서 선별 단백질과 PHF20과의 상관관계 규명_x000D_
？ 3차년도_x000D_
-PHF20 과발현 마우스의 체중 및 지방합성 관련 phenotype 확인_x000D_
-H&E 염색으로 PHF20 과발현 마우스 지방조직 모양 비교 분석_x000D_
-PHF20 과발현 마우스의 지방조직에서의 지방산 합성 관련 유전자 및 단백질 발현 검증_x000D_
-BMI 25이상 환자군에서의 PHF20와 선별 단백질의 발현 확인
두경부암에서 Warburg effect의 새로운 조절자로서 CTMP와 LETM1의 분자적 제어 기술 발굴
1. 두경부암 세포주에서 CTMP와 LETM1의 결합 유무 및 상호 과발현에 의한 영향 규명
- 두경부암 세포주에서 CTMP/LETM1 과발현시 PKB 신호전달에 미치는 영향 규명
- siRNA를 이용한 CTMP/LETM1의 Knnockdown시 세포 성장에 미치는 영향 확인
2. 두경부암 세포주의 유래 조직에 따른 인지질 분석을 이용한 분자 이미징 비교 분석
- 구인두, 후인두, 혀에서 유래된 세포주의 질량 분석기를 이용한 인지질 분석 비교
- 구인두, 후인두, 혀에서 유래된 암 조직을 이용하여 인지질의 분자이미징 방법 구축
3. 미토콘드리아의 형태학적 다이내믹 조절 인자(OPA1, Fis1)와의 기능적인 관계 (funtional link) 분석
- CTMP/LETM1이 과발현에 의한 OPA1, Fis1의 발현 변화 검증 및 미토콘드리아 형태 분석
- 두경부암 환자의 암조직에서 면역화학염색을 통해 OPA1, Fis1의 발현에 확인
- TEM 분석을 통하여 두경부암 환자의 암조직에서 미토콘드리아의 형태 분석
4. CTMP과 LETM1 과발현 혹은 knockdown 세포주 구축 및 질량분석기/bioinformatics를 이용한 핵심단백질선별
- 두경부암 세포주에서 CTMP과 LETM1 과발현 혹은 knockdown 세포주 구축
- Proteomics를 이용하여 구축된 세포주를 이용하여 증가 혹은 감소되어있는 핵심단백질 선별
5. 미토콘드리아의 형태학적 다이내믹 조절 인자(OPA1, Fis1)와의 물리적 상호작용(physical interaction) 규명
- 두경부암 세포주에서 CTMP/LETM1과 OPA1, Fis1의 물리적 상호 작용 분석
- 각 구성 단백질의 deleltion mutant 제작 및 GST-full down assay 를 통한 비교 분석
6. 선별된 핵심 단백질과 CTMP/LETM1 과의 상호 작용 및 임상적 의미 확인 분석
- 선별된 핵심단백질과 CTMP/LETM1의 상호 작용 분석
- 두경부암 환자의 암조직에서 선별된 핵심단백질의 증감에 대한 임상적 의미 상호 분석