연구의 내용 ● 본 연구는 도마뱀 꼬리 재생 기작 연구를 통해 선별된 재생 촉진 인자 ENPL을 인간 피부 재생 분야에 적용하는 것을 목표로 한다. ● 피부 손상 후 유도되는 저산소 환경에서 ENPL의 피부 재생 촉진 효과 입증을 목표로 한다. ● 따라서 저산소 조건의 in vitro, in vivo 실험을 통해 ENPL의 피부 재생 촉진 효과 및 기작 규명을 최종 목표로 하고, 이를 위하여 다음과 같은 연구를 수행하고자 한다. 1. 정상산소(normoxia) 및 저산소 환경에서 ENPL 발현 패턴 및 신호전달 기작 비교 분석 2. 저산소 환경에서 ENPL의 기능적 역할 규명 3. 저산소 환경에서 ENPL의 발현 증폭 및 억제에 의한 phenotype 분석 4. 저산소 환경에서 ENPL의 발현 증폭 및 억제에 의한 재생 촉진 효과 검증 5. 저산소 환경에서 ENPL의 발현 증폭 및 억제에 의한 신호 전달 경로 비교 분석 6. 신호 전달 경로에 대한 활성화 및 억제 처리를 통해 ENPL에 의한 피부 재생 촉진 신호 체계 규명 7. 세포 추적(cell trafficking)을 위한 GFP 유전자 및 αSMA 프로모터-mCherry 서열 도입 세포주 구축 8. 세포 탑재 바이오필름을 이용한 동물실험을 통해 생체 수준에서 ENPL의 재생 촉진 효과 검증 9. 인공 피부(air liquid interface culture; ALI) 모델을 이용한 인간 조직 수준에서 ENPL의 재생 촉진 효과 검증

연구의 내용 ● 본 연구는 도마뱀 꼬리 재생 기작 연구를 통해 선별된 재생 촉진 인자 ENPL을 인간 피부 재생 분야에 적용하는 것을 목표로 한다. ● 피부 손상 후 유도되는 저산소 환경에서 ENPL의 피부 재생 촉진 효과 입증을 목표로 한다. ● 따라서 저산소 조건의 in vitro, in vivo 실험을 통해 ENPL의 피부 재생 촉진 효과 및 기작 규명을 최종 목표로 하고, 이를 위하여 다음과 같은 연구를 수행하고자 한다. 1. 정상산소(normoxia) 및 저산소 환경에서 ENPL 발현 패턴 및 신호전달 기작 비교 분석 2. 저산소 환경에서 ENPL의 기능적 역할 규명 3. 저산소 환경에서 ENPL의 발현 증폭 및 억제에 의한 phenotype 분석 4. 저산소 환경에서 ENPL의 발현 증폭 및 억제에 의한 재생 촉진 효과 검증 5. 저산소 환경에서 ENPL의 발현 증폭 및 억제에 의한 신호 전달 경로 비교 분석 6. 신호 전달 경로에 대한 활성화 및 억제 처리를 통해 ENPL에 의한 피부 재생 촉진 신호 체계 규명 7. 세포 추적(cell trafficking)을 위한 GFP 유전자 및 αSMA 프로모터-mCherry 서열 도입 세포주 구축 8. 세포 탑재 바이오필름을 이용한 동물실험을 통해 생체 수준에서 ENPL의 재생 촉진 효과 검증 9. 인공 피부(air liquid interface culture; ALI) 모델을 이용한 인간 조직 수준에서 ENPL의 재생 촉진 효과 검증

1. 도마뱀 유래 단백질의 분리 및 동정을 통한 항암 인자 후보군 선별 * 단백질을 분리하고 in vitro screening system을 통해 유효 단백질 후보군 선별 - 도마뱀 꼬리 조직으로부터 단백질 혼합물을 추출하여 size chromatography, ion exchange chromatography를 통해 단백질을 부분 분리 및 분류 * Proteomics 기법을 이용하여 주요 항암 인자의 발굴 - 동정된 단백질의 서열을 분석하고, 단백질 분석 소프트웨어를 이용하여 주요 항암 단백질의 서열을 최종 동정 2. 항암 신호 전달 경로 규명 및 유전자 클로닝 * 선별된 주요 항암 인자의 기능 분석 및 항암 관련 신호 전달 경로 분석 - 선별된 주요 항암 인자를 중심으로 단백질들을 기능에 따라 clustering하여 분석한 데이터와 NCBI에 공개된 유전체 데이터를 통합하여 신호 전달 경로를 규명 * 선별된 주요 항암 인자의 클로닝을 통한 단일 단백질의 항암 효과 입증 - 단일 단백질을 다양한 암세포주에 처리하여 in vitro screening system을 통해 항암 효과를 입증 3. 펩티드 제제 제작 및 동물 실험을 통한 항암 효능 입증 * 기능성 도메인 발굴을 통한 펩티드 제제 제작 및 다양한 형태의 항암 물질 창출 - 클로닝한 유전자의 각 도메인에 대한 돌연변이를 제작하여 항암 기능성 도메인을 탐색하여 선별하고 펩티드 서열을 확립 * 동물 실험을 통한 항암 효능 입증 - 임상적 효과를 in vivo 실험을 통해 검증

1. 도마뱀 유래 단백질의 분리 및 동정을 통한 항암 인자 후보군 선별 * 단백질을 분리하고 in vitro screening system을 통해 유효 단백질 후보군 선별 - 도마뱀 꼬리 조직으로부터 단백질 혼합물을 추출하여 size chromatography, ion exchange chromatography를 통해 단백질을 부분 분리 및 분류 * Proteomics 기법을 이용하여 주요 항암 인자의 발굴 - 동정된 단백질의 서열을 분석하고, 단백질 분석 소프트웨어를 이용하여 주요 항암 단백질의 서열을 최종 동정 2. 항암 신호 전달 경로 규명 및 유전자 클로닝 * 선별된 주요 항암 인자의 기능 분석 및 항암 관련 신호 전달 경로 분석 - 선별된 주요 항암 인자를 중심으로 단백질들을 기능에 따라 clustering하여 분석한 데이터와 NCBI에 공개된 유전체 데이터를 통합하여 신호 전달 경로를 규명 * 선별된 주요 항암 인자의 클로닝을 통한 단일 단백질의 항암 효과 입증 - 단일 단백질을 다양한 암세포주에 처리하여 in vitro screening system을 통해 항암 효과를 입증 3. 펩티드 제제 제작 및 동물 실험을 통한 항암 효능 입증 * 기능성 도메인 발굴을 통한 펩티드 제제 제작 및 다양한 형태의 항암 물질 창출 - 클로닝한 유전자의 각 도메인에 대한 돌연변이를 제작하여 항암 기능성 도메인을 탐색하여 선별하고 펩티드 서열을 확립 * 동물 실험을 통한 항암 효능 입증 - 임상적 효과를 in vivo 실험을 통해 검증