1) 최종 목표 본 연구는 T/NK 공통 신규 공동자극 도메인과 다중 항원 표적 tandem-in vivo CAR(iCAR) 기반의 재조합 단백질 서열 및 기능 최적화 기술로 1) 차세대 고형암 표적 iCAR 면역치료제 플랫폼을 최적화하고, 면역관문억제제 병용 전략을 통해 2) 종양 미세환경(TME)의 면역억제성을 극복하고자 한다.2) 핵심 세부 목표 :...

? 본 연구의 개념: 새로운 NK세포 활성화 도메인을 도입한 재조합 TROP-2 CAR 융합 단백질을 통해 TROP-2 표적 CAR-NK세포를 만들어 면역항암 세포 치료제 후보 물질을 입증하고자 함. o 최종목표: 삼중음성 유방암 표적 재조합 키메릭 항원 수용체 단백질 도입 NK세포 치료제 개발 - 세부목표 1: NK세포 활성화를 위한 신규 신호전달 도메인...

? 본 연구의 개념: 새로운 NK세포 활성화 도메인을 도입한 재조합 TROP-2 CAR 융합 단백질을 통해 TROP-2 표적 CAR-NK세포를 만들어 면역항암 세포 치료제 후보 물질을 입증하고자 함. o 최종목표: 삼중음성 유방암 표적 재조합 키메릭 항원 수용체 단백질 도입 NK세포 치료제 개발 - 세부목표 1: NK세포 활성화를 위한 신규 신호전달 도메인...

▶ 1차년 연구 목표 및 내용: 항체 결합 재조합 단백질 (Antibody Binding Recombinant Protein, ABRP) 시스템 구축 ● 단백질의 세포 내 도입을 위한 protein transduction domain 선별 ● 단백질의 세포 막에 위치 시키기 위한 transmembrane domain 선정 ● 항체 결합을 위한 ED-TM, ED, PA, PG의 도메인 선별 ● 항체 결합 재조합 단백질 (ED-TM, ED, PA, PG) 시스템 발현 벡터 제작 ● ED-TM, ED, PA 및 PG 단백질 발현 최적화 ● 각각의 4종 단백질 정제 및 순도 검증 ● 각 4종 단백질의 면역세포 도입 효율 검증 ● 단백질 양, 세포수, 반응시간에 따른 변화 확인 ● 각 단백질에 FITC를 결합하여 검증함. ● 항체 및 항체-약물 접합체(ADC)의 면역세포 표면 도입 비율 최적화 ● 항체 및 ADC의 양, 반응시간, 배지 양 등에 따른 변화 확인 ● 항체 및 ADC에 FITC/Cy5.5를 결합하여 검증함. ● 항체 – Herceptin / ADC – Kadcyla HER2 양성암에 대해 검증 ▶ 2차년 연구 목표 및 내용: ADC 도입 면역세포의 in vitro 항암 효능 검증 ● 항체 결합 재조합 단백질 도입 후 면역세포의 특성 분석 (Biomarker) ● 면역세포 표면 개질 단백질 도입 면역세포의 장기보관 안정성 검증 ● HER2 양성암에 대한 면역세포 표적 전달 평가 ● CSLM을 통해 면역세포 표면에 도입 된 항체 또는 ADC의 암세포 인지 능력 검증 ● HER2 양성암에 대한 ADC grafted immune cell (AGIC) 의 항암 효능 평가. (Kadcyla grafted NK cell, KNK cell) ● Cytotox 및 Annexin V 로 확인. ● HER2 양성암: SK-Br-3, Calu-3, A549, BT474 ● HER2 음성암: MDA-MB-231, MCF-7 ● AGIC의 항암 효능 기전을 평가하기 위해 사이토카인 분비 및 면역세포의 수용체 변화등 검증 ● ELISA 및 FACS로 검증함. ● 다양한 항체 및 ADC의 결합 능력 검증 ● 항체: Pertuzumab, Rituximab, Ramucirumab, Obinutuzumab 등 ● ADC: Trodelvy, Enhertu, Padcev, Blenrep 등 ● 각 항체 및 ADC에 FITC를 결합하여 FACS로 검즘 ▶ 3차년 연구 목표 및 내용: ADC 도입 면역세포의 in vivo 항암 효능 검증 ● 환자 세포에서 AGIC의 암세포 표적 능력 검증 ● 환자 세포에서 AGIC의 항암 효능을 검증 ● CLSM으로 표적 능력 확인 ● Cytotox 및 Annenxin V로 확인. ● 암세포 이식 동물 모델에서 항암효능 평가 ● Kadcylar grafted NK cell (KNK) ● Herceptin grafted NK cell (HNK) ● 암세포 크기, 몸무게, 생존율율 평가 ● Bio-distribution assay: 동물 모델에서 KNK 및 HNK 투여 후 각 장기별 생체 내 분포 검증 ● Serum stability test: 혈액 내 복합체 안정성 검증 ● 암 조직 내 항암 효능에 따른 변화 검증 ● 면역세포 분포 검증 ● 2차년도에 도입시킨 항체 및 ADC에 대한 항암 효과를 암세포에서 검증 ● Cytotox assay 및 Annexin V로 확인.