1. 비소세포폐암 세포주 및 조직에서 TRIM21과 PD-L1의 발현 분석 - 정상과 NSCLC 세포주에서 TRIM21과 PD-L1의 발현 분석 - Public microarray datasets을 이용하여 폐암조직에서 TRIM21과 PD-L1의 발현 분석 - TGF-β와 IFN-γ처리에 의한 PD-L1 및 TRIM21 발현 비교분석 - TRIM21 과발현 및 결손 stable NSCLC 세포주 구축 2. TGF-β와 IFN-γ 신호에 의한 PD-L1 발현조절에서 TRIM21의 역할 규명 - PD-L1 발현에 있어 TRIM21의 역할 분석(TRIM21 과발현, siRNA knockdown에 따른 PD-L1 발현 분석) - TRIM21 발현(과발현/결손)에 의한 TGF-β 유도 PD-L1의 발현 분석 - TRIM21 발현(과발현/결손)에 의한 IFN-γ 유도 PD-L1의 발현 분석 3. PD-L1의 전사조절에 있어 TRIM21의 역할 규명 - ChIP assay와 reporter assay를 통해 PD-L1의 promoter 활성조절 분석 ● TGF-β 유도 전사인자(Smad) 활성에 있어 TRIM21의 역할 분석 ● IFN-γ 유도 전사인자(JAK/STAT/IRF) 활성에 있어 TRIM21의 역할 분석 4. PD-L1의 단백질 안정성에 있어 TRIM21의 역할 규명 - TRIM21과 PD-L1간의 결합능 분석 - PD-L1의 안정성 및 PTM 분석(ubiquitination, acetylation에 따른 안정성 및 lysosomal 분해 관련성을 PTM 저해제를 통해 확인) - PD-L1과 p300, USP4와의 결합능 및 안정성 분석 5. TRIM21 발현에 따른 암화 특성 규명 - TRIM21 발현에 따른 NSCLC 세포의 증식능, cancer stemness, EMT marker 분석 - NSCLC 세포의 암화 특성에 있어 TRIM21과 PD-L1간의 상관성 분석 6. TRIM21 발현에 따른 암 성장 및 전이활성 분석 - 실험동물 모델 (NOD/SCID mouse/Xenograft)을 이용한 TRIM21 발현에 따른 폐암 세포주의 성장 및 전이능 분석 - 조직 시료에서 TRIM21과 PD-L1 발현간의 상관성 분석 7. NSCLC의 면역회피 및 악성화에 있어 TRIM21의 역할 규명 - 폐암 조직 확보 및 시료에서 TRIM21과 PD-L1 발현 양상 검증(mRNA 발현분석 및 IHC) - NSCLC의 PD-L1 발현에 있어 TRIM21의 역할 및 임상적 의의를 결정

1. 비소세포폐암 세포주 및 조직에서 TRIM21과 PD-L1의 발현 분석 - 정상과 NSCLC 세포주에서 TRIM21과 PD-L1의 발현 분석 - Public microarray datasets을 이용하여 폐암조직에서 TRIM21과 PD-L1의 발현 분석 - TGF-β와 IFN-γ처리에 의한 PD-L1 및 TRIM21 발현 비교분석 - TRIM21 과발현 및 결손 stable NSCLC 세포주 구축 2. TGF-β와 IFN-γ 신호에 의한 PD-L1 발현조절에서 TRIM21의 역할 규명 - PD-L1 발현에 있어 TRIM21의 역할 분석(TRIM21 과발현, siRNA knockdown에 따른 PD-L1 발현 분석) - TRIM21 발현(과발현/결손)에 의한 TGF-β 유도 PD-L1의 발현 분석 - TRIM21 발현(과발현/결손)에 의한 IFN-γ 유도 PD-L1의 발현 분석 3. PD-L1의 전사조절에 있어 TRIM21의 역할 규명 - ChIP assay와 reporter assay를 통해 PD-L1의 promoter 활성조절 분석 ● TGF-β 유도 전사인자(Smad) 활성에 있어 TRIM21의 역할 분석 ● IFN-γ 유도 전사인자(JAK/STAT/IRF) 활성에 있어 TRIM21의 역할 분석 4. PD-L1의 단백질 안정성에 있어 TRIM21의 역할 규명 - TRIM21과 PD-L1간의 결합능 분석 - PD-L1의 안정성 및 PTM 분석(ubiquitination, acetylation에 따른 안정성 및 lysosomal 분해 관련성을 PTM 저해제를 통해 확인) - PD-L1과 p300, USP4와의 결합능 및 안정성 분석 5. TRIM21 발현에 따른 암화 특성 규명 - TRIM21 발현에 따른 NSCLC 세포의 증식능, cancer stemness, EMT marker 분석 - NSCLC 세포의 암화 특성에 있어 TRIM21과 PD-L1간의 상관성 분석 6. TRIM21 발현에 따른 암 성장 및 전이활성 분석 - 실험동물 모델 (NOD/SCID mouse/Xenograft)을 이용한 TRIM21 발현에 따른 폐암 세포주의 성장 및 전이능 분석 - 조직 시료에서 TRIM21과 PD-L1 발현간의 상관성 분석 7. NSCLC의 면역회피 및 악성화에 있어 TRIM21의 역할 규명 - 폐암 조직 확보 및 시료에서 TRIM21과 PD-L1 발현 양상 검증(mRNA 발현분석 및 IHC) - NSCLC의 PD-L1 발현에 있어 TRIM21의 역할 및 임상적 의의를 결정

본 연구는 헬리코박터 감염으로 생기는 만성 염증이 위암으로 이어지는 과정에서, 염증 신호를 조절하는 TGF-β의 작용을 제어하는 억제인자 TRIM21의 역할을 규명하는 연구임. 연구 목표는 TRIM21에 의한 TGF-β 신호전달 조절 분자기전을 밝히고, 염증 유발 인자에 따른 TRIM21 발현과 TGF-β 신호의 상관관계를 동물모델·임상시료에서 확인하는 데 있음. Smad7 결합, TGF-β receptor 안정성, IFN-γ 신호와의 cross-talk, 감염·고염식이 마우스 및 위 상피세포에서의 TRIM21 과발현/knockdown을 통해 염증·발암 제어 및 암억제 활성 평가가 핵심 내용임. 기대 효과는 위염·위암 예방을 위한 새로운 표적과 제어 기반기술, 치료 후보 검증 및 translational research 확립에 기여함.

본 과제는 헬리코박터 감염으로 생기는 만성 염증이 계속되며 위암으로 이어지는 과정에서, TGF-β 신호를 조절하는 신규 억제인자 TRIM21의 역할을 밝히는 연구임. 연구 목표는 TRIM21에 의한 TGF-β 신호조절 분자 기전과 IFN-γ 신호와의 상관관계를 규명하고, 헬리코박터 감염·고염식이 동물모델과 임상시료에서 TRIM21 발현- TGF-β 신호의 연관성으로 염증 제어 및 암억제 활성의 임상적 의의를 확인하는 데 있음. 연구내용은 TRIM21-Smad7 결합 및 TGF-β receptor 안정성, TRIM21 과발현·shRNA 결손, 헬리코박터 감염에 따른 염증·세포이동·EMT·세포 침윤, TRIM21 shRNA 또는 antisense oligonucleotide 기반 제어 검증을 포함함. 기대효과는 위염·위궤양·위암 예방의 새로운 표적 및 후보약물 개발의 기반기술 확보에 있음.