제 1항 또는 제 2항에 있어서,제 3 가이드 RNA(third guide RNA) 또는 이를 암호화하는 핵산;을 더 포함할 수 있고,상기 제 3 가이드 RNA는 제 3 가이드 도메인을 포함하는 제 3 crRNA(CRISPR RNA), 제 3 tracrRNA(trans-activating crRNA)를 포함하고,이 때, 상기 제 3 가이드 도메인은 상기 표적 핵산과 전부 상보적인 결합을 할 수 있고,상기 제 3 crRNA, 제 3 tracrRNA은 상기 Cas9 단백질과 상호작용하는 것을 특징으로 하는 조성물.

제 4항에 있어서,상기 제 3 가이드 도메인의 5'말단에서 제 3지점까지의 서열과 상기 제 2 가이드 도메인의 제 2지점에서 3'말단까지의 서열은 서로 90% 내지 100% 동일한 것을 특징으로 하는 조성물.

제 1항 또는 제 2항에 있어서,상기 제 1 가이드 RNA 및 상기 제 2 가이드 RNA는,서로 동일한 엑손 또는 인트론을 표적하는 것을 특징으로 하는 조성물.

표적 핵산을 조작하기 위한 조성물로서,상기 조성물은,Streptococcus pyogenes 유래의 Cas9 단백질 또는 이를 암호화하는 핵산;제 1 가이드 RNA(first guide RNA) 또는 이를 암호화하는 핵산; 및제 2 가이드 RNA(second guide RNA) 또는 이를 암호화하는 핵산;을 포함하고,상기 제 1 가이드 RNA는 제 1 가이드 도메인을 포함하는 제 1 crRNA(CRISPR RNA), 제 1 tracrRNA(trans-activating crRNA)를 포함하고,이 때, 상기 제 1 가이드 도메인은 상기 표적 핵산과 전부 상보적인 결합을 할 수 있고,상기 제 1 crRNA, 제 1 tracrRNA은 상기 Cas9 단백질과 상호작용하고,상기 제 2 가이드 RNA는 제 2 가이드 도메인을 포함하는 제 2 crRNA(CRISPR RNA), 제 2 tracrRNA(trans-activating crRNA)를 포함하고,이 때, 상기 제 2 가이드 도메인은 상기 표적 핵산과 전부 상보적인 결합을 할 수 있고,상기 제 2 crRNA, 제 2 tracrRNA은 상기 Cas9 단백질과 상호작용하고,상기 제 1 가이드 도메인의 제 1지점에서 3' 말단까지의 서열과 상기 제 2 가이드 도메인의 5' 말단에서 제 2지점까지의 서열은 서로 90% 내지 100% 동일하고,이 때, 상기 제 2가이드 RNA의 3'말단과 상기 제 2지점 사이에 상기 SpCas9 단백질에 대응되는 PAM(Proto-spacer-Adjacent Motif)서열을 포함하고 있는 것을 특징으로 하는 조성물.

표적 핵산을 조작하기 위한 조성물로서,상기 조성물은,Streptococcus pyogenes 유래의 Cas9 단백질 또는 이를 암호화하는 핵산;제 1 가이드 RNA(first guide RNA) 또는 이를 암호화하는 핵산; 및제 2 가이드 RNA(second guide RNA) 또는 이를 암호화하는 핵산;을 포함하고,상기 제 1 가이드 RNA는 제 1 가이드 도메인을 포함하는 제 1 crRNA(CRISPR RNA), 제 1 tracrRNA(trans-activating crRNA)를 포함하고,이 때, 상기 제 1 가이드 도메인은 상기 표적 핵산과 전부 상보적인 결합을 할 수 있고,상기 제 1 crRNA, 제 1 tracrRNA은 상기 Cas9 단백질과 상호작용하고,상기 제 2 가이드 RNA는 제 2 가이드 도메인을 포함하는 제 2 crRNA(CRISPR RNA), 제 2 tracrRNA(trans-activating crRNA)를 포함하고,이 때, 상기 제 2 가이드 도메인은 상기 표적 핵산과 전부 상보적인 결합을 할 수 있고,상기 제 2 crRNA, 제 2 tracrRNA은 상기 Cas9 단백질과 상호작용하고,상기 제 1 가이드 도메인의 5'말단에서 제 1지점까지의 서열과 상기 제 2 가이드 도메인의 5'말단에서 제 2지점까지의 서열은 서로 90% 내지 100% 상보성을 가지는 것을 특징으로 하는 조성물.

제 1항 또는 제 2항에 있어서,상기 제 2 가이드 도메인의 5'말단에서 제 2지점까지의 길이는 2 base 내지 16base인 것을 특징으로 하는 조성물.

제 1 항 또는 제 2항에 있어서,표적 핵산을 조작하기 위해 도너(donor)를 더 포함할 수 있고, 이 때, 상기 도너는 표적 핵산에 삽입하고자 하는 특정 핵산 서열의 양 말단에 상보적으로 결합할 수 있는 호몰로지 암(homology arm)인 것을 특징으로 하는 조성물.

제 1항 또는 제 2항에 있어서,상기 표적 핵산의 조작은, 넉인(Knock-in)인 것을 특징으로 하는 조성물.

제 1항 또는 제 2항에 있어서,상기 표적 핵산은 진핵생물의 게놈 시퀀스인 것을 특징으로 하는 조성물.

제 1항에 있어서,상기 PAM 서열은,5'-NGG-3'(N은 A, T, C 또는 G임)인 것을 특징으로 하는 조성물.

표적 핵산을 조작하는 방법으로,상기 제 1항 또는 2항 중 선택되는 어느 하나의 조성물을 세포에 도입시키는 단계;를 포함하고,이 때, 상기 세포는 원핵세포 또는 분리된 진핵세포인 것을 특징으로 하는 방법.

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