나노구배패턴을 포함하는 배양용기를 이용한 배아줄기세포 배양에 적합한 표면구조의 스크리닝 방법
A screening method for the optimal surface structure of embryonic stem cell culture using a cell culture plate comprising gradient nanopattern
특허 요약
본 발명은 직경(Diameter) 또는 간격(Spacing)이 일정하게 변화하는 구배 나노기둥 어레이를 포함하는 세포배양용기에 세포를 배양하는 단계를 포함하는 배아줄기세포 배양에 적합한 표면구조를 스크리닝하는 방법, 상기 스크리닝 방법에 사용되는 일정하게 증가하는 직경을 갖는 나노기둥이 일정하게 감소하는 간격으로 균일하게 배열된 나노기둥을 포함하는 세포배양용기 및 상기 스크리닝 방법에 의해 선별된 조건의 나노기둥을 포함하는 세포배양용기에 세포를 배양하는 단계를 포함하는 지지세포 없이 줄기세포능(stemness)을 유지하면서 배아줄기세포를 배양하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 일정하게 증가하는 직경(Diameter)을 갖는 나노기둥이 일정하게 감소하는 간격(Spacing)으로 균일하게 배열된 나노기둥을 포함하는 세포배양용기는 하나의 배양용기 내에서 다양한 표면 형태를 제공할 수 있으므로, 동일한 조건에서 수행되는 단일 배양에 의해 표면 형태의 변화가 세포특성에 미치는 영향을 동시에 모니터링할 수 있으며, 이를 이용하여 세포배양에 적합한 최적의 표면형태를 선별할 수 있다. 상기 스크리닝을 통해 선별된 인간 배아줄기세포를 배양하는 방법은 값비싼 세포외 기질을 코팅하거나 지지세포를 이용할 필요없이 줄기세포능을 유지하면서 증식시킬 수 있는 방법을 제공할 수 있다.
청구항
번호청구항
1

직경(Diameter) 또는 간격(Spacing)이 일정하게 변화하는 구배 나노기둥 어레이를 포함하는 세포배양용기에 세포를 배양하는 단계를 포함하는, 지지세포 없이 줄기세포능(stemness)을 유지하면서 배아줄기세포를 배양할 수 있는 표면구조를 스크리닝하는 방법.

2

제1항에 있어서,상기 직경 또는 간격이 일정하게 변화하는 구배 나노기둥 어레이의 각기 다른 직경 및 간격의 나노기둥을 포함하는 영역에서 채취한 배양된 배아줄기세포의 특성을 분석하는 단계를 추가로 포함하는 것인 스크리닝 방법.

3

제2항에 있어서,상기 배양된 배아줄기세포의 특성을 분석하는 단계는 전분화능 마커의 발현을 측정함으로써 수행되는 것인 스크리닝 방법.

4

제3항에 있어서,상기 전분화능 마커는 Oct4인 것인 스크리닝 방법.

5

제2항에 있어서,상기 배양된 배아줄기세포의 특성을 분석하는 단계는 세포부착성 마커, 세포골격 마커 또는 병소부착 마커의 발현을 추가로 측정함으로써 수행되는 것인 스크리닝 방법.

6

제5항에 있어서,상기 세포부착성 마커는 E-카데린(E-cadherin), 세포골격 마커는 팔로이딘(phalloidin) 및 병소부착 마커는 빈쿨린(vinculin)인 것인 스크리닝 방법.

7

삭제

8

일정하게 증가하는 직경을 갖는 나노기둥이 일정하게 감소하는 간격으로 균일하게 배열된 나노기둥을 포함하는, 지지세포 없이 줄기세포능(stemness)을 유지하면서 배아줄기세포를 배양할 수 있는 표면구조 스크리닝용 세포배양용기.

9

제8항에 있어서,상기 나노기둥은 100 nm 내지 400 nm의 직경을 가지며 350 nm 내지 50nm의 간격으로 배열된 것인 세포배양용기.

10

120 nm 내지 170 nm의 직경을 갖는 나노기둥이 320 nm 내지 250 nm 간격으로 균일하게 배열된 나노기둥을 포함하는, 줄기세포능 유지를 위한 배아줄기세포 배양용기.

11

120 nm 내지 170 nm의 직경을 갖는 나노기둥이 320 nm 내지 250 nm 간격으로 균일하게 배열된 나노기둥을 포함하는 세포배양용기에 지지세포 없이 세포를 배양하는 단계를 포함하는 줄기세포능(stemness)을 유지하면서 배아줄기세포를 배양하는 방법.

12

제11항에 있어서,상기 배아줄기세포는 90%를 초과하는 수준으로 Oct4 발현율이 유지되는 것인 방법.