본 발명은 아세틸콜린 수용체 저해 펩타이드 및 이의 용도에 관한 것으로, 랜덤 펩타이드 재조합 파지를 이용하여 아세틸콜린 수용체와 결합력이 높은 파지를 스크리닝하고, 파지의 DNA를 통해 아세틸콜린 수용체 결합 펩타이드를 선별하였다. 선별된 펩타이드를 이용하여 아세틸콜린 수용체와의 결합력 및 아세틸콜린 수용체 작용 억제 효과를 확인하였고, 펩타이드의 변형을 통해 아세틸콜린 수용체와의 결합에 중요한 펩타이드 부위 및 서열을 확인함으로써, 본 발명의 아세틸콜린 수용체 저해 펩타이드를 이용하여 주름 개선용 화장료 조성물, 아세틸콜린 수용체 관련 질환의 예방 또는 치료를 위한 의약품 및 개선용 건강기능식품을 개발할 수 있을 것으로 기대된다.