인체 갑상선조직에서 단일세포 분리기법
The protocol for single cell isolation from human thyroid
특허 요약
본 발명은 단일 세포 유전체분석(signle cell genomics), 단일 세포 대사체분석(single cell metabolomics) 및 오가노이드(organoid) 제조를 포함하는 새로운 인체 갑상선 연구에 사용할 수 있는 90%이상의 생존율을 갖는 사람 갑상선 세포 및 그 분리 방법에 관한 것이다.
청구항
번호청구항
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  1. 분리된 갑상선 조직을 저온 보관액에 담근채 실험실로 이동하는 단계;2) 배양접시에서 조직을 잘게 자른 후, 이동 용기로 옮기는 단계; 3) 효소반응을 위해 무혈청 배지에 0.1 내지 0.15%의 트립신과 50 내지 400 unit/ml의 콜라게나아제 타입 4의 혼합 용액과 37℃ 쉐이킹 인큐베이터에서 30분 내지 90분간 반응시키는 단계;4) 원심분리 후 상층액을 제거하는 단계;5) 분리된 세포 덩어리를 1 mL의 10% FBS(우태아혈청)가 혼합된 배지에서 파이펫으로 기계적 소화(mechanical digestion)하는 단계; 6) 70um의 세포 스트레이너(cell strainer)에서 불순물을 제거하는 단계; 7) 원심분리 후 상층액을 제거하는 단계;8) 적혈구 제거 완충액을 반응시키는 단계; 9) 원심분리 후 상층액을 제거하는 단계;10) 무혈청 배지로 세척한 후 원심분리하여 상층액을 제거하는 단계; 및11) 40um의 세포 스트레이너(cell strainer)에서 불순물을 제거하여 최종 세포를 획득하는 단계;를 포함하고, 효소반응은 0.125% 트립신과 100 unit/ml의 콜라게나아제 타입 4의 혼합 용액에서 60분간 반응시키는 것을 특징으로 하는 생존율이 향상된 갑상선 세포 분리 방법
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제1항에 있어서, 분리된 갑상선 조직은 사람, 흰쥐(rat), 생쥐(mouse) 또는 토끼로부터 분리한 것을 특징으로 하는 갑상선 세포 분리 방법

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제1항에 있어서, 분리된 갑상선 조직은 정상 갑상선 또는 갑상선 암 조직인 것을 특징으로 하는 갑상선 세포 분리 방법

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제1항에 있어서, 저온 보관액은 4℃ HBSS인 것을 특징으로 하는 갑상선 세포 분리 방법

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제1항에 있어서, 원심분리는 4,000 rpm에서 수행되는 것을 특징으로 하는 갑상선 세포 분리 방법

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제1항에 있어서, 배지는 RPMI1640인 것을 특징으로 하는 갑상선 세포 분리 방법

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