목적 단백질의 수용성 및 발현량 증가를 위한 개량된 NEXT 융합 태그 및 이의 용도
Improved NEXT fusion tag for increasing water solubility and expression level of target protein and uses thereof
특허 요약
본 발명은 목적 단백질의 수용성 및 발현량 증가를 위해 개량된 NEXT 융합 태그 및 이의 용도에 관한 것으로, 본 발명의 융합 태그 및 이를 포함하는 재조합 벡터는 숙주세포 내에서 목적 단백질의 수용성 및 발현량을 증가시킴으로써, 산업적으로 유용하게 이용될 수 있을 것이다.
청구항
번호청구항
1

서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 또는 서열번호 4의 아미노산 서열로 이루어진 융합 태그.

2

제1항의 융합 태그를 코딩하는 폴리뉴클레오티드.

3

제2항에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 7 또는 서열번호 8의 염기서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드.

4

서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 또는 서열번호 4의 아미노산 서열로 이루어진 융합 태그(fusion tag)를 코딩하는 폴리뉴클레오티드와 목적 단백질을 코딩하는 유전자가 순차적으로 연결된 것을 특징으로 하는 재조합 벡터.

5

제4항에 있어서, 상기 목적 단백질은 효소, 항원, 항체, 세포수용체, 구조 단백질, 혈청 및 세포 단백질로 이루어진 군으로부터 선택되는 생물학적 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 재조합 벡터.

6

제4항 또는 제5항의 재조합 벡터로 형질전환된 단리된 숙주세포.

7

제4항 또는 제5항의 재조합 벡터로 단리된 숙주세포를 형질전환하여 목적 단백질 코딩 유전자를 발현하는 단계를 포함하는, 시험관 내 또는 생체 외에서 목적 단백질의 수용성 및 발현량을 증가시키는 방법.

8

제4항 또는 제5항의 재조합 벡터를 단리된 숙주세포에 형질전환하는 단계; 및상기 형질전환된 단리된 숙주세포를 배양하여 목적 단백질을 발현시키는 단계;를 포함하는, 시험관 내 또는 생체 외의 단리된 숙주세포 내에서 수용성 및 발현량이 증가된 목적 단백질의 생산 방법.

9

서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3 또는 서열번호 4의 아미노산 서열로 이루어진 융합 태그(fusion tag)를 코딩하는 폴리뉴클레오티드와 목적 단백질을 코딩하는 유전자가 순차적으로 연결된 재조합 벡터를 유효성분으로 포함하는, 수용성 및 발현량이 증가된 목적 단백질의 생산용 조성물.

10

(1) 서열번호 9의 아미노산으로 이루어진 융합 태그의 아미노산 서열 중 N-말단에 존재하는 4개의 아미노산을 제외한 나머지 아미노산에 대해 서열 셔플링(sequence shuffling)을 수행하여 서열 라이브러리를 확보하는 단계; 및(2) 상기 (1) 단계에서 확보된 서열 라이브러리에서 각 서열의 항균 활성(antimicrobial activity)을 예측하는 단계;를 포함하는, 단리된 숙주세포에 대한 세포독성이 낮고 목적 단백질의 수용성 및 발현량을 증가시키기 위한 융합 태그의 스크리닝 방법.

11

제10항에 있어서, 상기 (2) 단계의 항균 활성 예측은 AntiBP Server를 이용하는 것을 특징으로 하는 방법.

12

제11항에 있어서, 상기 (2) 단계의 예측 결과 항균 활성을 나타내지 않는 융합 태그 서열이 확인되지 않으면, 서열 셔플링을 재수행하여 서열 라이브러리를 재확보한 후 항균 활성 예측을 반복적으로 수행하는 것을 특징으로 하는 방법.

13

제10항에 있어서, 상기 (2) 단계의 예측한 각 서열의 항균 활성을 확인하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.