미토케이마 형질전환 초파리를 이용한 미토파지 조절유전자 스크리닝 방법
Screening method of the mitophagy regulator genes using mt-Keima transgenic Drosophila
특허 요약
본 발명은 미토케이마(mt-Keima) 유전자를 포함하는 벡터를 초파리에 형질전환시켜 미토케이마 유전자가 도입된 초파리 모델을 제작하여 초파리 각각의 조직에서 미토케이마가 발현됨을 확인하고, 미토케이마 발현 초파리를 이용해 미토파지 조절유전자 스크리닝 시스템을 구축함으로써, 상기 미토케이마 유전자 형질전환 초파리를 이용해 미토파지 증진 및 억제 유전자들을 발굴하는 미토파지 조절 유전자 스크리닝 방법으로 유용하게 사용될 수 있다.
청구항
번호청구항
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제 1항에 있어서 상기 단계 2)의 벡터의 미토케이마 유전자의 발현은 GAL4에 의해 조절되는 것을 특징으로 하는 미토파지 조절 유전자 스크리닝 방법.

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제 2항에 있어서 상기 단계 2)의 형질전환 초파리를 모든 조직에서 또는 조직특이적으로 GAL4를 발현하는 형질전환 초파리와 교배하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 미토파지 조절 유전자 스크리닝 방법.

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제 1항에 있어서, 상기 RNA 간섭 서열은 인산화효소(kinase) 유전자의 mRNA 발현에 대한 RNA 간섭 서열인 것을 특징으로 하는 미토파지 조절 유전자 스크리닝 방법.

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삭제

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  1. 미토케이마(mt-Keima) 유전자를 초파리 형질전환용 벡터에 클로닝하여 미토케이마 유전자를 포함하는 벡터를 제조하는 단계; 2) 상기 단계 1)의 벡터를 초파리에 형질전환시키는 단계;3) 실험군으로 상기 단계 2)로부터 제조된 미토케이마(mt-Keima) 형질전환 초파리와 RNA 간섭 서열을 발현하는 형질전환 초파리를 교배하는 단계;4) 상기 단계 3)의 교배된 초파리에서 미토파지 활성을 측정하는 단계; 및5) 무교배 대조군과 비교하여 미토파지 활성이 증가되거나 감소된 경우, 상기 RNA 간섭 서열의 타겟 유전자를 미토파지 활성을 조절하는 유전자로 판별하는 단계를 포함하는 미토파지 조절 유전자 스크리닝 방법으로서,상기 단계 4)의 미토파지 활성은 a) 상기 단계 4)의 초파리로부터 공초점 현미경을 이용하여 미토케이마 형광이미지를 얻는 단계; b) 상기 단계 a)에서 얻은 형광이미지를 구성하는 각 점(pixel)을 녹색 형광 신호의 세기가 가로축, 적색 형광 신호의 세기가 세로축이며, 녹색 형광 신호 및 적색 형광 신호가 모두 약한점이 위치하는 1사분면, 녹색 형광 신호는 약하고 적색 형광 신호는 강한 점이 위치하는 2사분면, 녹색 형광 신호 및 적색 형광 신호가 모두 강한점이 위치하는 3사분면, 녹색 형광 신호는 강하고 적색 형광 신호는 약한점이 위치하는 4사분면의 4개의 분면으로 구성된 점 점도면(pixel dot plot)으로 전환하는 단계;c) 공초점현미경 이미지상의 붉은 점이 상기 단계 b)의 점 점도면(pixel dot plot)상의 2사분면에 위치하도록 사분면 기준선을 조절하는 단계; 및d) 각 사분면에 위치하는 점(pixel)의 수를 산출하고, 하기 수학식 1로 표현되는 수식의 값을 구하는 단계를 포함하는 미토파지 활성 측정방법에 의해 측정되는 것을 특징으로 하는 미토파지 조절 유전자 스크리닝 방법.[수학식 1](#1은 1 사분면에 표시되는 점(pixel)의 수, #2는 2 사분면에 표시되는 점(pixel)의 수, #3은 3 사분면에 표시되는 점(pixel)의 수, #4는 4 사분면에 표시되는 점(pixel)의 수, #b는 공초점현미경 이미지에서 배경(background)에 해당하는 점(pixel)의 수).