인시츄 배양방법을 이용한 고형종양의 핵형분석방법
Method for Karyotyping of Solid Tumor Cells Using in situ Culture Thereof
특허 요약
본 발명은 고형종양세포(solid tumor cell)의 인시츄(in situ) 배양방법과 인시츄 핵형분석방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로는, 종양발생의 기원이 되는 클론성 염색체이상(clonal chromosomal abnormalities)을 분석하기 위해, 현미경 관찰을 위한 커버슬립(coverslips) 또는 슬라이드를 이용하여 고형종양세포를 인시츄 배양하고 이를 수확(harvest)하는 방법에 관한 것이다. 또한 본 발명은 상기 인시츄 배양법으로부터 수확된 검체를 인시츄 핵형분석하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따르면, 종래의 플라스크 배양법에 비해 고형종양세포의 배양성공률을 높이고, 배양시간의 단축이 가능하며, 종양세포의 클론성(clonality) 평가가 용이하다는 장점이 있다. 또한 현미경 관찰에 사용되는 일반적인 커버슬립 또는 슬라이드를 배양의 지지체로 활용하고, 소요되는 배지의 양이 상대적으로 적고, 요구되는 시약의 간소화로 비용의 절감효과가 있다. 고형종양, 핵형분석, 중기세포, 인시츄 배양
청구항
번호청구항
1

다음 단계를 포함하는 고형종양세포의 인시츄(in situ) 배양방법: (a) 고형종양조직 절편을 원심분리하여 고형종양세포를 수득하는 단계; (b) 상기 수득된 고형종양세포를 현미경 검경용 커버슬립 또는 슬라이드를 지지체로 하여, 중기(metaphase)로 배양하는 단계; 및 (c) 상기 배양된 고형종양세포를 상기 지지체에 부착된 상태에서 고정화처리하는 단계.

2

제1항에 있어서, 상기 배양단계는 3% 내지 7% CO2 분위기에서, 30℃ 내지 40℃로 배양하는 것을 특징으로 하는 방법.

3

제1항에 있어서, 상기 고정화처리 단계는 (a) 상기 고형종양세포에 콜시미드를 첨가하여 블로킹처리하는 단계; (b) 상기 블로킹된 고형종양세포를 저장액에 넣고 실온에 방치하는 단계; 및 (c) 상기 고형종양세포를 고정액으로 고정화처리하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.

4

제1항에 있어서, 상기 고형종양은 중추신경계종양, 림프종, 두경부종양, 갑상선종양, 간세포암 및 비강암으로 구성된 군에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 방법.

5

다음 단계를 포함하는 고형종양세포의 인시츄 핵형분석방법: (a) 고형종양조직 절편을 원심분리하여 고형종양세포를 수득하는 단계; (b) 상기 수득된 고형종양세포를 현미경 검경용 커버슬립 또는 슬라이드를 지지체로 하여, 중기로 배양하는 단계; (c) 상기 배양된 고형종양세포를 상기 지지체에 부착된 상태에서 고정화처리하는 단계; 및 (d) 상기 고정화처리된 고형종양세포의 염색체를 표지하여 핵형을 분석하는 단계.

6

제5항에 있어서, 상기 분석단계의 표지는 김자(Giemsa) 염색인 것을 특징으로 하는 방법.

7

제5항에 있어서, 상기 분석단계의 표지는 DNA 탐침(probe)을 이용하는 것임을 특징으로 하는 방법.

8

제5항에 있어서, 상기 배양단계는 3% 내지 7% CO2 분위기에서, 30℃ 내지 40℃로 배양하는 것을 특징으로 하는 방법.

9

제5항에 있어서, 상기 고정화처리 단계는 (a) 상기 고형종양세포에 콜시미드를 첨가하여 블로킹처리하는 단계; (b) 상기 블로킹된 고형종양세포를 저장액에 넣고 실온에 방치하는 단계; 및 (c) 상기 고형종양세포를 고정액으로 고정화처리하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.

10

제5항에 있어서, 상기 고형종양은 중추신경계종양, 림프종, 두경부종양, 갑상선종양, 간세포암 및 비강암으로 구성된 군에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 방법.