메탄자화균에서 효과적인 유전자 발현 시스템 개발 및 이를 이용한 유전자 발현 방법
Development of dynamic gene expression system in methanotrophs and gene expression method using the same
특허 요약
본 발명은 메탄자화균에서 효과적인 유전자 발현 시스템에 관한 것으로, 상세하게는 메탄자화균에서 효과적인 유전자 발현을 나타내고 IPTG에 의해 유도되는 강력한 프로모터를 포함하는 재조합 벡터, 이를 도입한 형질전환 메탄자화균 및 형질전환 메탄자화균에서 목적유전자의 발현 방법에 관한 것으로서, 기존의 P tac 및 P L/O4/A1 프로모터를 사용한 경우와 비교하여, 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 IPTG 유도성 P A1/O5/O4 프로모터, 상기 IPTG 유도성 프로모터에 작동 가능하도록 연결된 목적유전자 및 LacI를 코딩하는 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 메탄자화균에 도입하는 경우 목적유전자의 발현량을 유의하게 증대시킬 수 있다.
청구항
번호청구항
1

서열번호 2의 염기서열로 이루어진 IPTG (isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside) 유도성 프로모터 및 LacI를 코딩하는 유전자를 포함하는 메탄자화균(methanotroph) 형질전환용 재조합 벡터.

2

제1항에 있어서, 상기 IPTG 유도성 프로모터에 작동 가능하도록 연결된 목적유전자를 추가로 포함하는 것인, 재조합 벡터.

3

제1항에 있어서, 상기 LacI를 코딩하는 유전자는 서열번호 10의 염기서열로 이루어진 것인, 재조합 벡터.

4

제1항에 있어서, 상기 메탄자화균은 메틸로마이크로븀 알칼리필럼(Methylomicrobium alcaliphilum) 20Z인 것인, 재조합 벡터.

5

서열번호 2의 염기서열로 이루어진 IPTG (isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside) 유도성 프로모터;상기 IPTG 유도성 프로모터에 작동 가능하도록 연결된 목적유전자; 및LacI를 코딩하는 유전자;를 포함하는 재조합 벡터를 메탄자화균(methanotroph)에 도입한 형질전환 메탄자화균.

6

제5항에 있어서, 상기 LacI를 코딩하는 유전자는 서열번호 10의 염기서열로 이루어진 것인, 형질전환 메탄자화균.

7

제5항에 있어서, 상기 메탄자화균은 메틸로마이크로븀 알칼리필럼 20Z인 것인, 형질전환 메탄자화균.

8

제5항의 형질전환 메탄자화균을 탄소원 및 IPTG를 포함하는 조건에서 배양하는 배양단계를 포함하는 형질전환 메탄자화균에서 목적유전자의 발현 방법.

9

제8항에 있어서, 상기 메탄자화균은 메틸로마이크로븀 알칼리필럼 20Z인 것인, 형질전환 메탄자화균에서 목적유전자의 발현 방법.

10

제8항에 있어서, 상기 탄소원은 메탄올 또는 메탄인 것인, 형질전환 메탄자화균에서 목적유전자의 발현 방법.

11

제8항에 있어서, 상기 배양단계에서 상기 IPTG는 0.05 mM 내지 0.5 mM의 농도인 것인, 형질전환 메탄자화균에서 목적유전자의 발현 방법.

12

제8항에 있어서, 상기 배양단계는 진탕 배양으로 수행되는 것인, 형질전환 메탄자화균에서 목적유전자의 발현 방법.