포도에서 발생하는 3종의 바이러스 검출을 위한 프라이머 세트 및 이를 이용한 바이러스 검출 방법
Primer set for simultaneous detection of three viruses in Grapevine and method for detecting three viruses in Grapevine using the same
특허 요약
포도잎말림바이러스 1, 포도잎말림바이러스 3 및 포도얼룩반점바이러스에 특이적인 프라이머 세트, 상기 프라이머 세트를 포함하는 포도 바이러스 진단용 조성물, 상기 조성물을 포함하는 진단용 키트, 및 이들을 이용하여 PCR을 수행하는 단계를 포함하는 진단 방법에 관한 것에 관한 것이다.
청구항
번호청구항
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서열번호 1의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드 및 서열번호 2의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제1 프라이머 세트; 서열번호 3의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드 및 서열번호 4의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제2 프라이머 세트; 및서열번호 5의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드 및 서열번호 6의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제3 프라이머 세트를 포함하는, 포도잎말림바이러스 1(GLRaV1: Grapevine leafroll associated virus 1), 포도잎말림바이러스 3(GLRaV3: Grapevine leafroll associated virus 3) 및 포도얼룩반점바이러스(GFkV: Grapevine fleck virus)의 표적 서열을 증폭하기 위한 프라이머 세트.

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청구항 1에 있어서, 서열번호 7의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드 및 서열번호 8의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제4 프라이머 세트를 더 포함하는 것인 프라이머 세트.

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서열번호 1의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드 및 서열번호 2의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제1 프라이머 세트; 서열번호 3의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드 및 서열번호 4의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제2 프라이머 세트; 및서열번호 5의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드 및 서열번호 6의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제3 프라이머 세트를 포함하는, 식물체에서 포도잎말림바이러스 1, 포도잎말림바이러스 3 및 포도얼룩반점바이러스로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 바이러스의 감염을 다중으로 진단하기 위한 조성물.

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청구항 3에 있어서, 서열번호 7의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드 및 서열번호 8의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제4 프라이머 세트를 더 포함하는 것인 조성물.

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서열번호 1의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드 및 서열번호 2의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제1 프라이머 세트; 서열번호 3의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드 및 서열번호 4의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제2 프라이머 세트; 및서열번호 5의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드 및 서열번호 6의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제3 프라이머 세트를 포함하는,포도잎말림바이러스 1, 포도잎말림바이러스 3 및 포도얼룩반점바이러스로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 바이러스의 감염을 다중으로 진단하기 위한 키트.

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청구항 5에 있어서, 서열번호 7의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드 및 서열번호 8의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제4 프라이머 세트를 더 포함하는 것인 키트.

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주형으로서 포도 식물체 유래 시료로부터 분리된 핵산, 및서열번호 1의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드 및 서열번호 2의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제1 프라이머 세트; 서열번호 3의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드 및 서열번호 4의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제2 프라이머 세트; 및 서열번호 5의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드 및 서열번호 6의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제3 프라이머 세트를 혼합하는 혼합물을 인큐베이션하여 중합효소 연쇄반응을 수행하는 단계를 포함하는 포도잎말림바이러스 1, 포도잎말림바이러스 3 및 포도얼룩반점바이러스로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 바이러스의 감염을 진단하는 방법.

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청구항 7에 있어서, 상기 시료는 포도잎말림바이러스 1, 포도잎말림바이러스 3 또는 포도얼룩반점바이러스의 감염이 의심되는 포도 식물체로부터 분리된 잎, 줄기, 뿌리, 꽃, 화분, 종자 및 열매로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 생물학적 시료인 것인 방법.

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청구항 7에 있어서, 상기 중합효소 연쇄반응은 역전사 중합효소 연쇄반응인 것인 방법.

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청구항 7에 있어서, 상기 중합효소 연쇄반응에서 생성된 중합효소 연쇄반응 산물을 분석하는 단계를 더 포함하는 것인 방법.

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청구항 9에 있어서, 상기 역전사 중합효소 연쇄반응을 수행하는 단계에서, 프라이머 세트의 농도는 2.5 내지 10 pmol/㎕인 것인 방법.

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청구항 9에 있어서, 상기 역전사 중합효소 연쇄반응은 50℃에서 30분 동안 역전사하는 단계; 95℃에서 15분 동안 변성하는 단계; 95℃에서 20초 동안 반응시키고, 58℃에서 40초 동안 반응시킨 후, 72℃에서 3분 동안 증폭시키는 단계; 및 72℃에서 3분 동안 최종적으로 신장시키는 단계를 포함하는 것인 방법.

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청구항 12에 있어서, 상기 증폭시키는 단계를 30회 내지 40회로 반복 수행하는 것인 방법.

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청구항 7에 있어서, 상기 중합효소 연쇄반응을 수행하는 단계에서, 서열번호 7의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드 및 서열번호 8의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제4 프라이머 세트를 더 포함하여 수행하는 것인 방법.

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청구항 7에 있어서, 상기 중합효소 연쇄반응을 수행하는 단계에서 얻어진 산물 중 제1, 제2 및 제3의 프라이머 세트의 증폭 산물 중 하나 이상이 존재하는 경우, 상기 포도 식물체는 포도잎말림바이러스 1, 포도잎말림바이러스 3 및 포도얼룩반점바이러스로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 바이러스에 감염된 것으로 진단하는 단계를 더 포함하는 것인 방법.