사과 및 배에 발생하는 바이러스 및 바이로이드 감염 다중 진단을 위한 프라이머 세트 및 진단방법
Primer set for multiple detection apple and pear viruses and viroid and method for detecting said viruses and viroid using the same
특허 요약
본 발명은 사과 및 배에 발생하는 바이러스 및 바이로이드 감염 다중 진단을 위한 역전사 중합효소 연쇄반응용 프라이머 세트, 조성물, 진단용 키트 및 진단방법에 관한 것이다. 본 발명은 Apple mosaic virus(ApMV), Apple stem grooving virus(ASGV), Apple stem pitting virus(ASPV), Apple chlorotic leaf spot virus(ACLSV) 및 Apple scar skin viroid(ASSVd)를 동시에 효율적으로 진단할 수 있는 프라이머 세트의 조합으로 이루어진 다중 진단용 프라이머 세트, 조성물, 진단용 키트 및 진단방법에 관한 것으로, 본 발명의 진단 조성물을 이용하여 RT-PCR 수행 시 위양성 없이 감염 시료로부터 사과 및 배의 바이러스 및 바이로이드만을 신속, 간편하게 진단할 수 있어 진단 비용 및 노력 절감 효과가 있다. 본 발명을 이용하면 과수 바이러스 및 바이로이드의 효율적인 진단으로 인해 고품질의 사과 및 배 묘목을 생산・유통하여 농업 현장에서 발생하는 문제를 해결하는데 기여할 수 있다.
청구항
번호청구항
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3

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5

(a) 시료에 서열번호 1로 표시되는 염기서열 및 서열번호 2로 표시되는 염기서열을 포함하는 ACLSV 감염 진단용 프라이머 세트; 서열번호 3으로 표시되는 염기서열 및 서열번호 4로 표시되는 염기서열을 포함하는 ASPV 감염 진단용 프라이머 세트; 서열번호 5로 표시되는 염기서열 및 서열번호 6으로 표시되는 염기서열을 포함하는 ASGV 감염 진단용 프라이머 세트; 서열번호 7로 표시되는 염기서열 및 서열번호 8로 표시되는 염기서열을 포함하는 ASSVd 감염 진단용 프라이머 세트; 및 서열번호 9로 표시되는 염기서열 및 서열번호 10으로 표시되는 염기서열을 포함하는 ApMV 감염 진단용 프라이머 세트;로 구성된 프라이머 세트를 첨가하여 역전사 중합효소 연쇄반응(RT-PCR)을 수행하는 단계; 및(b) 역전사 중합효소 연쇄반응 산물에서 사과 및 배에 발생하는 바이러스 및 바이로이드를 검출하는 단계;를 포함하되,상기 (a) 단계의 개별 프라이머 세트의 농도는, 17 내지 23 pmol/㎕이며,상기 (a) 단계의 역전사 중합효소 연쇄반응(RT-PCR)은, (a-1) 50℃에서 30분 동안 역전사하는 단계; (a-2) 95℃에서 10분의 변성 단계; (a-3) 95℃에서 30초간 반응시킨 다음 58℃에서 30초간 반응 후, 72℃에서 1분간 증폭시키는 단계; (a-4) 단계를 통해 72℃에서 5분 동안 최종적으로 신장(elongation)시키는 단계로 수행되는 것인, 사과 및 배에 발생하는 바이러스 및 바이로이드 감염 다중 진단 방법.

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제5항에 있어서, 상기 (a) 단계의 개별 프라이머 세트의 농도는 20 pmol/㎕인 것을 특징으로 하는, 사과 및 배에 발생하는 바이러스 및 바이로이드 감염 다중 진단 방법.

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제5항에 있어서, 상기 (a-3) 단계는 35 사이클을 수행하는 것인, 사과 및 배에 발생하는 바이러스 및 바이로이드 감염 다중 진단 방법.

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제5항에 있어서, 상기 (a) 단계의 역전사 중합효소 연쇄반응은 서열번호 11로 표시되는 염기서열 및 서열번호 12로 표시되는 염기서열을 포함하는 nad5(NADH dehydrogenase subunit 5) 진단용 프라이머 세트를 더 포함하여 수행하는 것을 특징으로 하는, 사과 및 배에 발생하는 바이러스 및 바이로이드 감염 다중 진단 방법.