토홀드 스위치 시스템을 이용한 생물학적 지표 검출용 키트 및 검출방법
Kit for detecting biomarker using toehold switch system and detection method thereof
특허 요약
본 발명은 토홀드 스위치 시스템을 이용한 생물학적 지표 검출용 키트 및 이를 이용한 검출방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로 토홀드 영역을 포함하는 헤어핀 구조 올리고머; 무세포 반응액; 및 기질을 포함하는 CD3ε 검출용 키트 및 SARS-CoV-2 검출방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 검출 키트는 기존 키트에 비해 단순하고 빠른 시간 내에 정확한 표적 mRNA의 검출이 가능하여 신장 이식 급성 거부반응의 진단 지표인 CD3ε mRNA를 우수한 효율로 검출 가능함을 확인하였는바, 신장 이식 급성 거부반응을 조기에 진단할 수 있으며, 이 기술을 이용하면 확산속도 및 감염률이 높은 SARS-CoV-2의 검출에 있어 기존 방법을 대체하여 유용하게 활용될 수 있을 것이다.
청구항
번호청구항
1

토홀드 영역(Toehold region), 이중가닥 핵산서열1, 루프서열1, 이중가닥 핵산서열2, 루프서열2, 링커서열 및 발현 핵산서열을 포함하는 헤어핀 구조 올리고머; 무세포(Cell-free) 반응액; 및 기질을 포함하는, CD3ε 검출용 키트로서,상기 헤어핀 구조 올리고머는 서열번호 1 및 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 것이며,상기 발현 핵산서열은 베타-갈락토시다아제(β-galactosidase; LacZ)를 암호화하는 유전자 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 것인, 검출용 키트.

2

제1항에 있어서,상기 토홀드 영역은 CD3ε mRNA에 상보적으로 결합하는 것을 특징으로 하는, 키트.

3

삭제

4

삭제

5

삭제

6

제1항에 있어서, 상기 무세포 반응액은 아미노산, rNTP, tRNA, RNA 중합효소, 번역 인자, 아미노아실-tRNA 합성효소(aminoacyl-tRNA synthetase) 및 리보솜을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키트.

7

제1항에 있어서, 상기 기질은 클로로페놀 레드-β-D-갈락토피라노사이드(chlorophenol red-β-D-galactopyranoside; CPRG)인 것을 특징으로 하는, 키트.

8

하기의 단계를 포함하는, CD3ε의 검출방법:(a) 피검자 유래 생물학적 시료를 제1항의 키트에 첨가하여 반응시키는 단계; 및(b) 비색반응에 의한 반응액의 색 변화를 확인하는 단계.

9

제8항에 있어서, 상기 생물학적 시료는 조직, 세포, 전혈, 혈액, 타액, 객담, 뇌척수액 및 뇨로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는, 검출방법.

10

제8항에 있어서, 상기 단계 (a)에서 생물학적 시료를 상기 키트와 반응시키기 전에, 상기 시료를 이용해 핵산 서열 기반 증폭(nucleic acid sequence-based amplification; NASBA) 반응을 수행하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 검출방법.

11

제8항에 있어서, 상기 단계 (a)에서 반응은 2 내지 6시간 동안 이루어지는 것을 특징으로 하는, 검출방법.

12

제8항에 있어서, 상기 단계 (b)에서, 반응액의 색이 노란색에서 자색으로 변화하는 경우 CD3ε가 존재하는 것으로 판단하는 것을 특징으로 하는, 검출방법.