4-하이드록시부티르산 생산용 형질전환 메탄자화균 및 이의 용도
Transformed methanotrophs for producing 4-Hydroxybutyric acid and uses thereof
특허 요약
본 발명은 CoA-의존성 숙신산 세미알데히드 탈수소효소, 4-하이드록시부티레이트 탈수소효소, NADPH-의존성 숙신산 세미알데히드 환원 효소 및 숙신산 세미알데히드 탈수소효소로 이루어진 군으로부터 선택되는 2 이상의 효소의 활성이 내재적 활성에 비해 강화된, 4-하이드록시부티르산(4-Hydroxybutyric acid) 생산용 형질전환 메탄자화균; 상기 형질전환 메탄자화균을 사용한 4-하이드록시부티르산의 제조방법; 및 상기 형질전환 메탄자화균을 포함하는 4-하이드록시부티르산 생산용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 형질전환 메탄자화균은 C1 탄소원으로부터 4-하이드록시부티르산을 높은 수율로 생산할 수 있는바, 친환경적이고 경제적으로 4-하이드록시부티르산의 대량 생산에 유용하게 사용될 수 있다.
청구항
번호청구항
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제5항에 있어서, 상기 2-옥소글루타르산탈수소효소를 코딩하는 유전자(sucAB), 포스포에놀피루브산 카르복실화효소를 코딩하는 유전자(ppc), 이소시트르산탈수소효소를 코딩하는 유전자(icd)는 각각 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9의 염기서열로 이루어진 것인, 형질전환 메탄자화균.

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CoA-의존성 숙신산 세미알데히드 탈수소효소(CoA-dependent succinate semialdehyde dehydrogenase) 및 4-하이드록시부티레이트 탈수소효소(4-hydroxybutyrate dehydrogenase); CoA-의존성 숙신산 세미알데히드 탈수소효소 및 NADPH-의존성 숙신산 세미알데히드 환원 효소(NADPH-dependent succinate semialdehyde reductase);및 숙신산 세미알데히드 탈수소효소(Succinate semialdehyde dehydrogenase) 및 NADPH-의존성 숙신산 세미알데히드 환원 효소로 이루어진 군으로부터 선택되는 효소의 활성이 내재적 활성에 비해 강화된, 4-하이드록시부티르산(4-Hydroxybutyric acid) 생산용 형질전환 메탄자화균으로, 상기 메탄자화균은 메틸로시너스 트리코스포리움(Methylosinus trichosporium) OB3b인, 형질전환 메탄자화균.

2

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3

제1항에 있어서, 추가로 젖산탈수소효소(lactate dehydrogenase)의 활성이 내재적 활성에 비해 약화 또는 불활성된 것인, 형질전환 메탄자화균,

4

제3항에 있어서, 추가로 아세트산인산화효소(acetate kinase)의 활성이 내재적 활성에 비해 약화 또는 불활성화된 것인, 형질전환 메탄자화균.

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제1항에 있어서, 추가로 2-옥소글루타르산탈수소효소(2-Oxoglutarate dehydrogenase), 포스포에놀피루브산 카르복실화효소(Phosphoenolpyruvate carboxylase) 또는 이소시트르산탈수소효소(Isocitrate dehydrogenase)의 활성이 내재적 활성에 비해 강화된 것인, 형질전환 메탄자화균.

6

제1항에 있어서, 상기 CoA-의존성 숙신산 세미알데히드 탈수소효소를 코딩하는 유전자(sucD)는 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 것인, 형질전환 메탄자화균.

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제1항에 있어서, 상기 4-하이드록시부티레이트 탈수소효소를 코딩하는 유전자(4hbD)는 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 것인, 형질전환 메탄자화균.

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제1항에 있어서, 상기 NADPH-의존성 숙신산 세미알데히드 환원 효소를 코딩하는 유전자(yqhD) 서열번호 3의 염기서열로 이루어진 것인, 형질전환 메탄자화균.

9

제1항에 있어서, 상기 숙신산 세미알데히드 탈수소효소를 코딩하는 유전자(SacD)는 서열번호 4의 염기서열로 이루어진 것인, 형질전환 메탄자화균.

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제3항에 있어서, 상기 젖산탈수소효소를 코딩하는 유전자(ldh)는 서열번호 5의 염기서열로 이루어진 것인, 형질전환 메탄자화균.

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제4항에 있어서, 상기 아세트산인산화효소를 코딩하는 유전자(ack)는 서열번호 6의 염기서열로 이루어진 것인, 형질전환 메탄자화균.

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제1항에 있어서, 상기 형질전환 메탄자화균은 야생형에 비해 4-하이드록시부티르산 생산능이 향상된 것인, 형질전환 메탄자화균.

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C1 탄소원을 포함하는 배양액에 제1항, 제3항 내지 제12항 및 제15항 중 어느 한 항의 메틸로시너스 트리코스포리움(Methylosinus trichosporium) OB3b 형질전환 메탄자화균을 배양하는 단계를 포함하는, 4-하이드록시부티르산의 제조방법.

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제16항에 있어서, 상기 배양액으로부터 4-하이드록시부티르산을 회수하는 단계를 추가로 포함하는, 4-하이드록시부티르산의 제조방법.

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제1항, 제3항 내지 제12항 및 제15항 중 어느 한 항의 메틸로시너스 트리코스포리움(Methylosinus trichosporium) OB3b 형질전환 메탄자화균을 포함하는, 4-하이드록시부티르산 생산용 조성물.